اصول میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ کانفوکال لیزری
میکروسکوپ فلورسانس
1. میکروسکوپ فلورسانس وسیله ای است که از نور ماوراء بنفش به عنوان منبع نور برای روشن کردن جسم مورد آزمایش استفاده می کند و باعث می شود که فلورسانس ساطع کند و سپس شکل و مکان جسم را زیر میکروسکوپ مشاهده می کند. میکروسکوپ فلورسانس برای مطالعه جذب، انتقال، توزیع و محلی سازی مواد داخل سلولی استفاده می شود. برخی از مواد موجود در سلول ها، مانند کلروفیل، پس از قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش می توانند فلورسانس منتشر کنند. اگرچه برخی از مواد به خودی خود نمی توانند فلورسانس منتشر کنند، اما پس از رنگ آمیزی با رنگ های فلورسنت یا آنتی بادی های فلورسنت و تابش نور ماوراء بنفش نیز می توانند فلورسانس منتشر کنند. میکروسکوپ فلورسانس یکی از ابزارهای تحقیقات کمی و کیفی بر روی این مواد است.
2. اصل میکروسکوپ فلورسانس:
(الف) منبع نور: منبع نور نوری با طول موج های مختلف (از ماوراء بنفش تا مادون قرمز) ساطع می کند.
(ب) منبع نور فیلتر تحریک: انتقال نور با طول موج خاص که می تواند فلورسانس را در نمونه ایجاد کند، در حالی که نوری را که برای فلورسانس تحریک بی فایده است مسدود می کند.
(C) نمونه فلورسنت: عموماً با رنگدانه فلورسنت رنگ آمیزی می شود.
(د) فیلتر مسدود کننده: به طور انتخابی فلورسانس را با مسدود کردن تحریکی که توسط نمونه جذب نشده است منتقل می کند و برخی از طول موج ها نیز به طور انتخابی در فلورسانس منتقل می شوند. میکروسکوپی که از نور ماوراء بنفش به عنوان منبع نور برای انتشار فلورسانس از اجسام تحت تابش استفاده می کند. میکروسکوپ الکترونی اولین بار توسط Knorr و Harroska در برلین آلمان در سال 1931 مونتاژ شد. این نوع میکروسکوپ از پرتوهای الکترونی پرسرعت به جای پرتوهای نور استفاده می کند. با توجه به طول موج بسیار کوتاهتر جریان الکترونی در مقایسه با امواج نور، بزرگنمایی میکروسکوپ الکترونی می تواند به 8{3}}0000 برابر با حداقل حد تفکیک 0.2 نانومتر برسد. میکروسکوپ الکترونی روبشی که استفاده از آن را در سال 1963 آغاز کرد، به مردم اجازه می دهد تا ساختارهای ریز روی سطح اجسام را ببینند.
3. دامنه کاربرد: برای بزرگنمایی تصاویر اجسام کوچک استفاده می شود. به طور کلی برای مشاهده زیست شناسی، پزشکی، ذرات میکروسکوپی و غیره استفاده می شود.
میکروسکوپ کانفوکال
1. یک میکروسکوپ کانفوکال یک نیمه عدسی نیمه بازتابنده به مسیر نور منعکس شده اضافه می کند، که نور منعکس شده را که قبلاً از عدسی عبور کرده است به جهات دیگر خم می کند. یک بافل با یک سوراخ در نقطه کانونی آن وجود دارد و سوراخ کوچک در نقطه کانونی قرار دارد. پشت بافل یک لوله فتو ضربی قرار دارد. می توان تصور کرد که نور منعکس شده قبل و بعد از نقطه کانونی نور تشخیص نمی تواند روی سوراخ کوچک از طریق این سیستم هم کانونی متمرکز شود و توسط بافل مسدود می شود. بنابراین آنچه که فتومتر اندازه گیری می کند، شدت نور بازتاب شده در نقطه کانونی است.
2. اصل: میکروسکوپ های نوری سنتی از منبع نور میدانی استفاده می کنند و تصویر هر نقطه روی نمونه تحت تأثیر پراش یا نور پراکنده از نقاط مجاور قرار می گیرد. میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری از یک منبع نور نقطه ای استفاده می کند که توسط پرتو لیزری که از یک سوراخ سوزنی روشن عبور می کند برای اسکن هر نقطه در صفحه کانونی نمونه استفاده می کند. نقطه روشن روی نمونه در سوراخ پین کاوشگر تصویر می شود و نقطه به نقطه یا خط توسط لوله فتو ضربی (PMT) یا دستگاه جفت ترموالکتریک (ccccd) پس از سوراخ پروب دریافت می شود و به سرعت یک تصویر فلورسنت بر روی صفحه نمایش مانیتور کامپیوتر ایجاد می کند. . سوراخ روشنایی و سوراخ تشخیص نسبت به صفحه کانونی عدسی شیئی کونژوگه شده اند. نقاط روی صفحه کانونی به طور همزمان روی سوراخ روشنایی و سوراخ سوزنی انتشار متمرکز می شوند و نقاط خارج از صفحه کانونی در سوراخ تشخیص تصویربرداری نمی شوند. این منجر به یک تصویر هم کانونی می شود که سطح مقطع اپتیکال نمونه است که بر اشکال تاری در تصاویر میکروسکوپ عمومی غلبه می کند.
3. زمینه های کاربردی: شامل پزشکی، تحقیقات حیوانی و گیاهی، بیوشیمی، باکتری شناسی، زیست شناسی سلولی، جنین شناسی بافت، علوم غذایی، ژنتیک، فارماکولوژی، فیزیولوژی، اپتیک، آسیب شناسی، گیاه شناسی، علوم اعصاب، زیست شناسی دریایی، علم مواد، علم الکترونیک، مکانیک. ، زمین شناسی نفت و کانی شناسی.
