الزامات تولید نمونه برای میکروسکوپ فلورسانس

الزامات تولید نمونه برای میکروسکوپ فلورسانس

(1) اسلاید شیشه ای
ضخامت اسلاید باید بین 0.8 و 1.2 میلی متر باشد. اگر لام خیلی ضخیم باشد از یک طرف نور بیشتری جذب می کند و از طرف دیگر اجازه نمی دهد نور تحریک روی نمونه جمع شود. لام شیشه ای باید صاف، ضخامت یکنواخت باشد و هیچ فلورسانس خود به خودی آشکاری نداشته باشد. گاهی اوقات اسلایدهای شیشه ای کوارتز مورد نیاز است.

(2) اسلاید شیشه ای را بپوشانید
ضخامت شیشه روکش حدود 0.17 میلی متر و صاف است. به منظور افزایش نور تحریک، می توان از شیشه پوشش تداخل نیز استفاده کرد. این یک شیشه پوششی با طراحی خاص با چندین لایه از مواد (مانند فلوراید منیزیم) است که اثرات تداخلی متفاوتی بر نور با طول موج های مختلف دارد. می تواند اجازه دهد فلورسانس به آرامی عبور کند، در حالی که نور تحریک بازتابی می تواند نمونه را تحریک کند.

(3) نمونه
برش های بافت یا سایر نمونه ها نباید خیلی ضخیم باشند. اگر آنها خیلی ضخیم باشند، بیشتر نور تحریک در قسمت پایین نمونه مصرف می شود، در حالی که قسمت بالایی که مستقیماً توسط عدسی شیئی مشاهده می شود کاملاً برانگیخته نمی شود. علاوه بر این، همپوشانی سلولی یا پوشاندن ناخالصی می تواند بر قضاوت تأثیر بگذارد.

(4) عامل آب بندی
گلیسیرین معمولاً به عنوان یک عامل نصب استفاده می شود که باید فاقد فلورسانس خود به خودی، بی رنگ و شفاف باشد. روشنایی فلورسانس در pH 8.{1}}.5 نسبتاً روشن است و به راحتی از بین نمی رود. بنابراین، مخلوط مساوی از گلیسرول و بافر کربنات 0.5.5mol/lpH9.0-9.5 معمولاً به عنوان عامل نصب استفاده می‌شود.

(5) روغن آینه
هنگام استفاده از میکروسکوپ فلورسانس میدان تاریک و میکروسکوپ روغن برای مشاهده نمونه ها، استفاده از روغن عدسی ضروری است. بهتر است از روغن لنزهای غیر فلورسنت مخصوص ساخته شده استفاده کنید، که می تواند همانطور که در بالا ذکر شد با گلیسرول جایگزین شود. از پارافین مایع نیز می توان استفاده کرد، اما ضریب شکست پایین است و تاثیر کمی بر کیفیت تصویر دارد.