تهیه و مشاهده نمونه های بیولوژیکی برای میکروسکوپ های الکترونی
وضوح یک میکروسکوپ به طول موج نور استفاده شده بستگی دارد. میکروسکوپ الکترونی که در سال 1933 پدیدار شد، به دلیل استفاده از پرتوهای الکترونی با طول موج بسیار کوتاهتر از نور مرئی به عنوان منابع نور، وضوح قابل توجهی بالاتر از میکروسکوپ نوری به دست آورد. منابع نوری مختلف نیز مجموعه ای از تفاوت ها را بین میکروسکوپ های الکترونی و میکروسکوپ های نوری تعیین می کنند.
بر اساس تفاوت در اصول تصویربرداری پرتوهای الکترونی و روشهای عمل آنها بر روی نمونهها، میکروسکوپهای الکترونی مدرن به انواع مختلفی تبدیل شدهاند. در حال حاضر، متداول ترین آنها میکروسکوپ های الکترونی عبوری و میکروسکوپ های الکترونی روبشی هستند. اولی دارای بزرگنمایی کلی است که می تواند بین 1000-10000000 بار تغییر کند، در حالی که دومی دارای بزرگنمایی کلی است که می تواند بین 20-300000 بار تغییر کند. این آزمایش عمدتاً تهیه دو نوع نمونه میکروسکوپ، میکروسکوپ الکترونی عبوری و میکروسکوپ الکترونی روبشی را معرفی میکند.
2، تجهیزات
1. سویه اشرشیاکلی مایل است.
2. محلول یا معرف: پنتیل استات، اسید سولفوریک غلیظ، اتانول بی آب، آب استریل، محلول آبی 2% فسفو تنگستات سدیم (pH 6.5-8.0)، پلی وینیل فرمالدئید 0.3% (محلول در کلروفرم آم استاتومون، cloroformum acetatomone, c. pBR322.
3. ابزار یا ابزارهای دیگر عبارتند از میکروسکوپ نوری معمولی، توری مسی، قیف چینی، بشر، ظروف پتری، قطره چکان استریل، موچین استریل، پین، اسلاید شیشه ای، صفحه شمارش، ماشین های پوشش خلاء، خشک کن نقطه بحرانی و غیره.
3، مراحل عملیات
(1) تهیه و مشاهده نمونه ها برای میکروسکوپ الکترونی عبوری
1. درمان مش فلزی
نمونه یک میکروسکوپ نوری برای مشاهده روی یک اسلاید شیشه ای قرار می گیرد. با این حال، در یک آینه انتقال، از آنجایی که الکترون ها نمی توانند به ورقه شیشه نفوذ کنند، یک ماده مش فقط می تواند به عنوان حامل استفاده شود که معمولاً به عنوان مش حامل نامیده می شود. توری حامل را به دلیل مواد و شکل های مختلف می توان به مشخصات مختلفی تقسیم کرد که در این میان از مش مسی با مش 200-400 (تعداد سوراخ) معمولا استفاده می شود. توری مسی را باید قبل از استفاده درمان کرد تا هرگونه کثیفی از بین برود و تمیز بماند، در غیر این صورت بر کیفیت فیلم نگهدارنده و شفافیت عکسهای نمونه تأثیر میگذارد. مش مسی 400 مش استفاده شده در این آزمایش را می توان به روش زیر عمل کرد: ابتدا چند ساعت با پنتیل استات خیسانده و شناور کنید، سپس چند بار با آب مقطر شستشو دهید و در نهایت مش مسی را در اتانول بی آب غوطه ور کرده و شناور کنید تا آبگیری شود. اگر پس از روش های فوق، توری مسی همچنان تمیز نبود، می توان آن را به مدت 2-1 دقیقه در اسید سولفوریک غلیظ رقیق (1:1) خیسانده یا چند دقیقه در محلول NaOH 1 درصد جوشاند، چندین بار با آب مقطر شستشو داد و سپس برای استفاده بعدی در اتانول بی آب آبگیری کرد.
