تفاوت بین میکروسکوپ کانفوکال لیزری و میکروسکوپ نوری سنتی
میکروسکوپ فلورسانس کانفوکال اسکن لیزری یک ابزار تجزیه و تحلیل مولکولی و زیست شناسی سلولی نسبتاً پیشرفته است که از رایانه، لیزر و فناوری پردازش تصویر برای به دست آوردن داده های سه بعدی از نمونه های بیولوژیکی استفاده می کند. این عمدتا برای مشاهده ساختار سلول های زنده و تغییرات بیولوژیکی مولکول ها و یون های خاص، تجزیه و تحلیل کمی و تعیین کمی در زمان واقعی استفاده می شود.
اصل میکروسکوپ کانفوکال لیزری: از سوراخ روشنایی که در پشت منبع نور قرار داده شده و سوراخ تشخیص که در جلوی آشکارساز قرار داده شده است برای درک روشنایی نقطه و تشخیص نقطه استفاده کنید. نور ساطع شده از منبع نور از طریق سوراخ روشنایی بر روی نقطه ای از صفحه کانونی نمونه متمرکز می شود و فلورسانس ساطع شده از این نقطه بر روی سوراخ تشخیص تصویر می شود و هر نور ساطع شده خارج از این نقطه توسط تشخیص مسدود می شود. سوراخ سوزنی سوراخ روشنایی و سوراخ تشخیص با نقطه تابش شده یا نقطه شناسایی شده مزدوج هستند، بنابراین نقطه شناسایی شده نقطه کانونی است و صفحه ای که نقطه شناسایی شده در آن قرار دارد صفحه هم کانونی است.
کامپیوتر نقاط شناسایی شده را بر روی صفحه کامپیوتر به صورت نقاط تصویر نمایش می دهد. به منظور تولید یک تصویر کامل، سیستم اسکن در مسیر نوری در صفحه کانونی نمونه اسکن می کند تا یک تصویر کانفوکال کامل تولید کند. تا زمانی که مرحله در امتداد محور Z به بالا و پایین حرکت می کند، یک لایه جدید از نمونه به صفحه هم کانونی منتقل می شود و لایه جدید نمونه روی مانیتور تصویر می شود. با حرکت مداوم محور Z می توان تصاویر پیوسته ای از لایه های مختلف نمونه به دست آورد. تصویر برش نور.
تفاوت بین میکروسکوپ های نوری سنتی
میکروسکوپ های فلورسانس سنتی یک نقص غیرقابل حل دارند: ساختارهای فلورسنت خارج از صفحه کانونی تار و تار هستند. دلیل آن این است که بیشتر نمونه های بیولوژیکی دارای ساختارهای همپوشانی هستند. اگر ساختارهای دارای برچسب فلورسنت در سطوح مختلف توزیع شده و همپوشانی داشته باشند، فلورسانس پراکنده از بالا یا پایین صفحه کانونی نیز توسط عدسی شیئی دریافت میشود و وضوح میکروسکوپ فلورسانس تا حد زیادی بهبود مییابد. كاهش دادن.
بر اساس میکروسکوپهای نوری سنتی، میکروسکوپهای هم کانونی اسکن لیزری از نور لیزر به عنوان منبع نور استفاده میکنند، از اصل و دستگاه فوکوس مزدوج استفاده میکنند و از رایانهها برای انجام پردازش تصویر دیجیتال، مشاهده، تجزیه و تحلیل و خروجی اشیاء مشاهدهشده استفاده میکنند. نمونه را می توان به صورت توموگرافی اسکن کرد و برای مشاهده و تجزیه و تحلیل غیر مخرب ساختار فضایی سه بعدی سلول ها تصویربرداری کرد. در عین حال، با استفاده از برچسبگذاری ایمونوفلورسانس و پروبهای برچسبگذاری فلورسنت یونی، این فناوری نه تنها میتواند سلولها و بخشهای بافتی ثابت را مشاهده کند، بلکه میتواند مشاهده و تشخیص دینامیکی بلادرنگ ساختار، مولکولها، یونها و فعالیتهای حیاتی سلولهای زنده را انجام دهد. در سطح درون سلولی مشاهده سیگنالهای فیزیولوژیکی مانند Ca2 پلاس، مقدار pH، پتانسیل غشاء و تغییرات مورفولوژی سلولی، به نسل جدیدی از ابزارهای تحقیقاتی قدرتمند در زمینههای مورفولوژی، زیستشناسی سلولی مولکولی، علوم اعصاب، فارماکولوژی و ژنتیک تبدیل شده است.
