روش ها و مراحل پردازش نمونه برای میکروسکوپ الکترونی
قبل از استفاده از میکروسکوپ الکترونی عبوری برای مشاهده نمونه های بیولوژیکی، نمونه ها باید از قبل پردازش شوند. دانشمندان از روشهای پردازش متفاوتی استفاده میکنند که نیازمندیهای تحقیقاتی متفاوت است.
تثبیت: به منظور حفظ هر چه بیشتر نمونه، از گلوتارآلدئید برای سفت شدن نمونه و از اسید اسمیک برای رنگ آمیزی چربی استفاده می شود.
تثبیت سرد: نمونه به سرعت در اتان مایع منجمد می شود تا آب متبلور نشود و به جای آن یخ آمورف تشکیل شود. نمونه هایی که به این شکل نگهداری می شوند آسیب کمتری دارند اما کنتراست تصویر بسیار کم است.
کم آبی: از اتانول و استون برای جایگزینی آب استفاده کنید.
padded: نمونه را می توان پس از بالشتک شدن تقسیم کرد.
تقسیم بندی: نمونه با استفاده از یک تیغه الماس به برش های نازک بریده می شود.
رنگآمیزی: اتمهای سنگینی مانند سرب یا اورانیوم الکترونها را قویتر از اتمهای سبکتر پراکنده میکنند و بنابراین میتوان از آنها برای افزایش کنتراست استفاده کرد.
قبل از استفاده از میکروسکوپ الکترونی عبوری برای مشاهده فلزات، نمونه باید باشد
ویروس ها در زیر میکروسکوپ الکترونی
برش به برشهای بسیار نازک (حدود 0.1 میلیمتر) و سپس استفاده از پرداخت الکترولیتی برای ادامه نازککردن فلز، اغلب منجر به تشکیل سوراخی در مرکز نمونه میشود که در آن الکترونها میتوانند از فلز بسیار نازک آنجا عبور کنند. فلزاتی که نمی توانند به صورت الکترولیتی صیقل داده شوند یا موادی که رسانا نیستند یا رسانایی ضعیفی دارند، مانند سیلیکون، معمولاً به صورت مکانیکی نازک می شوند و سپس با استفاده از ضربه یونی پردازش می شوند. برای جلوگیری از تجمع الکتریسیته ساکن در نمونههای غیر رسانا در میکروسکوپ الکترونی روبشی، سطوح آنها باید با یک لایه رسانا پوشانده شود.
چرا میکروسکوپ های الکترونی وضوح بالاتری دارند؟
همانطور که از نام آن پیداست، به اصطلاح میکروسکوپ الکترونی میکروسکوپی است که از پرتوهای الکترونی به عنوان منبع روشنایی استفاده می کند. از آنجایی که پرتو الکترونی می تواند تحت تأثیر میدان مغناطیسی خارجی یا میدان الکتریکی خم شود و پدیده انکساری شبیه به نور مرئی که از شیشه عبور می کند تشکیل دهد، می توانیم از این اثر فیزیکی برای ایجاد "عدسی" برای پرتو الکترونی استفاده کنیم. توسعه یک میکروسکوپ الکترونی ویژگی میکروسکوپ الکترونی عبوری (TEM) این است که ما از پرتوهای الکترونی استفاده می کنیم که از نمونه به تصویر می گذرد که با میکروسکوپ الکترونی روبشی (Scanning Electron Microscope, SEM) متفاوت است. از آنجایی که طول موج امواج الکترونی بسیار کوچکتر از طول موج نور مرئی است (طول موج امواج الکترونی 1{2}}0کیلوولت 0.0037 نانومتر است، در حالی که طول موج نور بنفش 400 نانومتر است) در تئوری، میتوان انتظار داشت که قدرت تفکیک میکروسکوپهای الکترونی بسیار بهتر از میکروسکوپهای نوری باشد. در واقع، قابلیت تفکیک میکروسکوپ های الکترونی مدرن به 0.1 نانومتر رسیده است. کتاب درسی انتخابی فیزیک برای دانشآموزان دبیرستانی با جزئیات بیشتر توضیح میدهد (اطلاعات کوچک در پس اثر فوتوالکتریک)
