تهیه و مشاهده نمونه های بیولوژیکی برای میکروسکوپ الکترونی

تهیه و مشاهده نمونه های بیولوژیکی برای میکروسکوپ الکترونی

وضوح میکروسکوپ به طول موج نور مورد استفاده بستگی دارد، میکروسکوپ الکترونی در سال 1933 ظاهر شد به دلیل استفاده از طول موج بسیار کوتاهتر از نور مرئی پرتو الکترونی به عنوان منبع نور، به طوری که وضوح آن می تواند از میکروسکوپ نوری تا حد زیادی بهبود یافته است. منبع نور متفاوت نیز مجموعه ای از تفاوت ها را بین میکروسکوپ الکترونی و میکروسکوپ نوری تعیین می کند.
با توجه به تفاوت در اصل تصویربرداری پرتو الکترونی و نقش نمونه در راه های مختلف، میکروسکوپ الکترونی مدرن برای تشکیل تعدادی از انواع توسعه یافته است، در حال حاضر * معمولاً از میکروسکوپ الکترونی عبوری و الکترون روبشی استفاده می شود. میکروسکوپ اولی می‌تواند در محدوده 1،000-1،000،000 برابر بزرگ‌نمایی کل محدوده تغییرات باشد، دومی می‌تواند در بزرگ‌نمایی کل از { {4}}، 000 برابر کل بزرگنمایی تغییرات بین. این آزمایش بر روی آماده‌سازی نمونه‌ها برای دو نوع میکروسکوپ، میکروسکوپ الکترونی عبوری و میکروسکوپ الکترونی روبشی تمرکز دارد.

مواد
1. سویه اشرشیاکلی (اشریشیا کلی، اشرشیاکلی) مایل.
2. محلول ها یا معرف ها آمیل استات، اسید سولفوریک غلیظ، اتانول بی آب، آب استریل، 2% سدیم فسفو تنگستیک اسید (PH 6.{3}}.0) محلول آبی، 0.3% محلول پلی وینیل فرمالدئید (محلول در تری کلرومتان)، سیتوکروم c، استات آمونیوم، پلاسمید pBR322.
3. ابزار یا سایر لوازم میکروسکوپ نوری معمولی، مش مسی، قیف چینی، بشر، ظرف صاف، بورت استریل، موچین استریل، لانست، اسلاید، ** صفحه شمارش، پوشش خلاء، خشک کن نقطه بحرانی و غیره.

مراحل عملیات
(I) تهیه نمونه و مشاهده میکروسکوپ الکترونی عبوری
1. درمان مش فلزی
نمونه هایی برای میکروسکوپ نوری برای مشاهده روی اسلایدها قرار می گیرند. با این حال، در میکروسکوپ الکترونی عبوری، از آنجایی که الکترون‌ها نمی‌توانند به ورقه شیشه نفوذ کنند، فقط از مواد مش می‌توان به عنوان حامل استفاده کرد که معمولاً مش حامل نامیده می‌شود. مش حامل را می توان به دلیل مواد و شکل های مختلف به مشخصات مختلفی تقسیم کرد که * رایج ترین آن مش 200-400 مش (تعداد سوراخ) مسی است. توری مسی باید قبل از استفاده درمان شود تا کثیفی روی آن از بین برود و تمیز بماند، در غیر این صورت بر کیفیت فیلم نگهدارنده و شفافیت عکس های نمونه تأثیر می گذارد. مش مسی مورد استفاده در این آزمایش مش 400 می باشد که می توان آن را به روش زیر عمل کرد: ابتدا آن را با آمیل استات به مدت چند ساعت سفید کنید سپس چند بار با آب مقطر شستشو دهید و سپس در اتانول بی آب سفید کنید. کم آبی بدن اگر مش مسی با روش فوق هنوز تمیز نیست، می توان از آن برای رقیق کردن اسید سولفوریک غلیظ (1:1) استفاده کرد که در 1 تا 2 دقیقه غوطه ور شده است، یا در محلول 1٪ NaOH که چند دقیقه جوشانده شده، چندین بار با آب مقطر شستشو داده شود. ، در آبگیری اتانول بی آب قرار می گیرد تا مورد استفاده قرار گیرد.

2. تهیه فیلم حمایتی
در مشاهده نمونه، در شبکه حامل نیز باید با لایه ای از فیلم بدون ساختار و یکنواخت پوشانده شود، در غیر این صورت نمونه های کوچک از سوراخ های شبکه حامل به بیرون نشت می کنند، این لایه فیلم معمولاً فیلم پشتیبانی یا فیلم حامل نامیده می شود. لایه پشتیبان باید نسبت به الکترون ها شفاف باشد و ضخامت آن معمولاً باید کمتر از 20 نانومتر باشد. تحت تاثیر پرتو الکترونی، فیلم همچنین باید دارای درجه خاصی از استحکام مکانیکی باشد، می تواند پایداری ساختار را حفظ کند و دارای هدایت حرارتی خوبی باشد. علاوه بر این، شبکه پشتیبانی نباید ساختار قابل مشاهده ای در زیر میکروسکوپ الکترونی داشته باشد و با نمونه حمل شده واکنش شیمیایی نداشته باشد و در مشاهده نمونه دخالتی نداشته باشد و ضخامت آن به طور کلی حدود 15 نانومتر است. فیلم پشتیبانی می تواند از فیلم پلاستیکی (به عنوان مثال فیلم پنبه آتش، فیلم پلی اتیلن فرمالدئید و غیره)، فیلم کربن یا فیلم فلزی (مثلا فیلم بریلیوم و غیره) ساخته شود. در شرایط کار معمولی، الزامات را می توان با یک فیلم پلاستیکی برآورده کرد، در حالی که تهیه فیلم پلاستیکی در فیلم چسب پنبه آتش نسبتا آسان است، اما استحکام به اندازه فیلم پلی اتیلن فرمالدئید قوی نیست.