ویژگی ها و کاربردهای میکروسکوپ کانفوکال لیزری
در حالی که در یک میکروسکوپ معمولی صفحه تصویر مشاهده از صفحات محوری مجاور با همپوشانی صفحه کانونی عدسی شیئی با آشکارساز جدا می شود، در یک میکروسکوپ کانفوکال این جداسازی با روشن کردن نمونه با یک نقطه پراش محدود به دست می آید. نور و فیلتر کردن نور سرگردان با استفاده از یک سوراخ سوزنی در مسیر نور جمع آوری شده در کانون مزدوج این نقطه نوری برای رسیدن به این ایزوله و در نتیجه بهبود وضوح.
فقط نور بازتاب شده از لایه نمونه مزدوج می تواند از سوراخ سوزنی در مسیر نور جمع آوری عبور کند، در حالی که بقیه بازتاب های لایه نمونه نامربوط توسط سوراخ سوزن مسدود می شوند. این افزایش قابل توجهی در وضوح می دهد. در زیر یک مقایسه جانبی از میکروسکوپ فلورسانس چند بعدی و میکروسکوپ کانفوکال از همان نمونه ضخیم نشان داده شده است. هنگامی که مجموعهای از تصاویر در سطوح کانونی مختلف گرفته میشوند، تصویری که معمولاً به آن "پشته z" میگویند تولید میشود که وضوح و کنتراست افزایش یافته توسط میکروسکوپ کانفوکال و دلایل اساسی این دستاوردها را نشان میدهد. مشاهده می شود که بررسی تصویر در بالای پشته که صفحه تصویربرداری بالای بافت قرار دارد، مقدار زیادی نور پراکنده را در تصویر فلورسانس نشان می دهد، در حالی که تصویر میکروسکوپ کانفوکال سیاه به نظر می رسد. این کاهش در PSF در جهت محوری به طور مستقیم به تفاوت وضوح مشاهده شده در رابط نوری در وسط پشته z کمک می کند.
تصویربرداری اسکن برش نوری
یکی دیگر از ویژگی های میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری این است که یک تکنیک تصویربرداری اسکن است. روشهای سنتی روشنایی میدان گسترده، کل نمونه را روشن میکنند تا تصویر را بتوان مستقیماً با چشم غیر مسلح یا آشکارساز گرفت، اما LSCM از یک یا چند پرتو متمرکز نور برای اسکن نمونه استفاده میکند، به طوری که تصویر حاصل را یک تصویر مینامند. برش نوری، همانطور که در نمودار زیر نشان داده شده است. تفاوت بین روشنایی میدان گسترده سنتی و نور کانونی اسکن لیزری در زیر نشان داده شده است.
بنابراین، روشی کاربردی از میکروسکوپ کانفوکال مدرن در شکل زیر نشان داده شده است. نور تحریک لیزر از یک آینه دو رنگ عبور داده می شود و از طریق یک جفت آینه گالوانومتر در جهت x و جهت y نمونه اسکن می شود و تحریک (یا بازتاب) نمونه از طریق سوراخ سوزنی به PMT می گذرد. آشکارساز ضبط می شود و تصویر اسکن شده ضبط شده توسط یک کامپیوتر بازسازی می شود تا یک تصویر واقعی از نمونه تولید شود.
