اصول میکروسکوپ فلورسانس و ویژگی های ساختاری

اصول میکروسکوپ فلورسانس و ویژگی های ساختاری

میکروسکوپ فلورسانس استفاده از راندمان لومینسانس بالا از نقطه، از طریق فیلتر کردن سیستم رنگ برای ساطع طول موج مشخصی از نور (مانند ماوراء بنفش 3650 به 4200 یا بنفش-آبی به 4200) به عنوان نور تحریک، تحریک است. از مواد فلورسنت درون نمونه، انواع رنگ‌های مختلف فلورسانس ساطع می‌شود و سپس از طریق شی و چشمی برای مشاهده بزرگ‌نمایی می‌شود. به این ترتیب، در پس‌زمینه کنتراست قوی، حتی اگر فلورسانس بسیار ضعیف باشد، شناسایی آسان است، حساسیت بالا، عمدتاً برای مطالعه ساختار و عملکرد سلول و ترکیب شیمیایی استفاده می‌شود. ساختار اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس از یک میکروسکوپ نوری معمولی به همراه برخی لوازم جانبی (مانند منبع نور فلورسانس، فیلترهای تحریک، جداکننده پرتوهای دو رنگ و فیلترهای مسدود کننده و غیره) تشکیل شده است. منبع نور فلورسنت - معمولاً از لامپ جیوه با فشار فوق‌العاده استفاده می‌شود (50-200W) که می‌تواند طول موج‌های مختلفی از نور ساطع کند، اما هر ماده فلورسنت قوی‌ترین طول موج تحریک فلورسانس را دارد، بنابراین نیاز به افزودن فیلترهای تحریک (عموماً) فیلتر تحریک فرابنفش، بنفش، آبی و سبز)، به طوری که تنها یک طول موج مشخص از نور تحریک از طریق تابش نمونه ها، در حالی که نور دیگر جذب می شود. بنابراین لازم است یک فیلتر تحریک (معمولا فیلترهای تحریک ماوراء بنفش، بنفش، آبی و سبز) اضافه شود، به طوری که تنها یک طول موج مشخص از نور تحریک از طریق نمونه، در حالی که نور دیگر جذب شود. هنگامی که هر ماده با نور تحریک تابش می شود، در مدت زمان بسیار کوتاهی فلورسانس مرئی با طول موج طولانی تر از نور تابیده شده ساطع می کند. فلورسانس دارای ویژگی است، به طور کلی ضعیف تر از نور تحریک، برای اینکه بتوان فلورسانس خاص را مشاهده کرد، باید عدسی شیئی که در پشت نیاز به افزودن مسدود کننده (یا سرکوب) قرار دارد برای استفاده انتخاب شود.

تفاوت میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ معمولی

1. روش روشنایی معمولاً در حال سقوط است، یعنی منبع نور از طریق عدسی شیئی بر روی نمونه پخش می شود.

2. منبع نور، نور فرابنفش است، با طول موج کوتاهتر و قدرت تفکیک بالاتر از میکروسکوپ های معمولی.

3. دو فیلتر مخصوص وجود دارد، یکی در جلوی منبع نور برای فیلتر کردن نور مرئی و دیگری بین چشمی و عدسی شیئی برای فیلتر کردن نور ماوراء بنفش برای محافظت از چشم انسان استفاده می شود.

میکروسکوپ فلورسانس نیز نوعی میکروسکوپ نوری است، تفاوت اصلی این است که طول موج تحریک این دو متفاوت است. این ساختار میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ نوری معمولی و استفاده از روش های مختلف را تعیین می کند.

میکروسکوپ فلورسانس ابزار اساسی برای سیتوشیمی ایمونوفلورسانس است. از منبع نور، سیستم صفحه فیلتر و سیستم نوری و سایر اجزای اصلی تشکیل شده است. از طول موج خاصی از نور برای تحریک نمونه برای انتشار فلورسانس استفاده می کند که از طریق عدسی شیئی و سیستم چشمی بزرگنمایی می شود تا تصویر فلورسانس نمونه را مشاهده کند.