میکروسکوپ های فلورسانس بر اساس مسیرهای نوری به دو نوع طبقه بندی می شوند:

میکروسکوپ های فلورسانس بر اساس مسیرهای نوری به دو نوع طبقه بندی می شوند:

1. میکروسکوپ فلورسانس انتقالی: منبع نور تحریک برای تحریک فلورسانس با عبور از ماده نمونه از طریق عدسی کندانسور استفاده می شود. می توان از متمرکز کننده های میدان تاریک که معمولاً استفاده می شود نیز استفاده کرد و از متمرکز کننده های معمولی می توان برای تنظیم بازتابنده به منظور تغییر جهت و کناری نور تحریک بر روی نمونه استفاده کرد. این یک میکروسکوپ فلورسانس نسبتاً قدیمی-مد است. مزیت آن فلورسانس قوی در بزرگنمایی کم است، اما عیب آن این است که با افزایش بزرگنمایی، فلورسانس آن کاهش می یابد. بنابراین برای مشاهده نمونه های بزرگتر بهتر است.

2. میکروسکوپ فلورسانس نوری در حال سقوط نوع جدیدی از میکروسکوپ فلورسانس است که در دوران مدرن توسعه یافته است. برخلاف موارد فوق، نور تحریک از لنز شیئی به سمت پایین بر روی سطح نمونه می‌افتد و از همان عدسی شیئی به عنوان کندانسور روشنایی و عدسی شیئی برای جمع‌آوری فلورسانس استفاده می‌کند. یک تقسیم کننده پرتو دو رنگ باید به مسیر نوری اضافه شود که 45 درجه از اورانیوم سبک فاصله دارد. زاویه، نور تحریک به عدسی شیئی منعکس شده و بر روی نمونه متمرکز می شود. فلورسانس تولید شده توسط نمونه و همچنین نور تحریک منعکس شده از سطح عدسی شیئی و شیشه پوششی، وارد عدسی شیئی می شود و به تقسیم کننده پرتو دو رنگ برمی گردد و نور تحریک و فلورسانس را از هم جدا می کند. سپس نور تحریک باقیمانده توسط فیلتر مسدود کننده جذب می شود. اگر از ترکیبات مختلف فیلترهای تحریک / جداکننده پرتو دو رنگ / فیلترهای مسدود کننده استفاده شود، می توانند نیازهای محصولات مختلف واکنش فلورسنت را برآورده کنند. از مزایای این میکروسکوپ فلورسانس می توان به روشنایی میدان یکنواخت، تصویربرداری واضح و فلورسانس قوی تر با بزرگنمایی بیشتر اشاره کرد.

(2) دستورالعمل استفاده از میکروسکوپ فلورسانس
1. منبع نور را روشن کنید. لامپ جیوه ای فشار قوی باید چند دقیقه پیش گرم شود تا به حداکثر روشنایی خود برسد.

2. میکروسکوپ فلورسانس انتقال نیاز به نصب فیلتر تحریک مورد نیاز بین منبع لامپ و کندانسور، و فیلتر مسدود کننده مربوطه در پشت عدسی شیئی دارد. میکروسکوپ فلورسانس نور در حال سقوط باید فیلتر تحریک مورد نیاز / تقسیم کننده پرتو دو رنگ / بلوک فیلتر مسدود کننده را در شکاف مسیر نوری وارد کند.

3. با میکروسکوپ کم قدرت- مشاهده کنید و مرکز منبع نور را مطابق با دستگاه تنظیم انواع مختلف میکروسکوپ های فلورسانس تنظیم کنید، به طوری که در مرکز کل نقطه روشنایی قرار گیرد.

4. نمونه را قرار داده و آن را برای مشاهده متمرکز کنید. در حین استفاده باید توجه داشت: قبل از نصب فیلتر مستقیماً با چشم خود مشاهده نکنید تا از آسیب به چشم جلوگیری شود. هنگام مشاهده نمونه ها با میکروسکوپ روغنی، باید از یک میکروسکوپ روغن غیر فلورسنت ویژه استفاده شود. پس از خاموش شدن لامپ جیوه فشار بالا، نمی توان فوراً آن را دوباره روشن کرد. 5 دقیقه طول می کشد تا دوباره راه اندازی شود، در غیر این صورت ناپایدار خواهد بود و طول عمر لامپ جیوه ای را تحت تاثیر قرار می دهد.

(3) با مشاهده زیر میکروسکوپ فلورسانس بر روی یک سکوی آموزشی با استفاده از یک فیلتر نور بنفش آبی، سلول‌های رنگ‌آمیزی شده با رنگ فلورسنت نارنجی آکریدین 0.01 درصد دیده می‌شوند. هسته و سیتوپلاسم برای تولید دو رنگ مختلف فلورسانس (سبز تیره و قرمز نارنجی) برانگیخته می شوند.