افزایش مزایای میکروسکوپ لیزری مولتی فوتونی

افزایش مزایای میکروسکوپ لیزری مولتی فوتونی

میکروسکوپ چند فوتونی اسکن لیزری یک پیشرفت بزرگ نسبت به میکروسکوپ نوری است. می‌تواند ساختار عمیق سلول‌های زنده، سلول‌ها و بافت‌های ثابت را مشاهده کند و می‌تواند ساختارهای صفحه Z چندلایه واضح و تیز، یعنی بخش‌های نوری را به‌دست آورد، که می‌تواند ساختار جامد سه‌بعدی نمونه را بسازد. میکروسکوپ کانفوکال از یک منبع نور لیزری استفاده می کند که پس از انبساط، کل صفحه کانونی پشتی عدسی شیئی را پر می کند و سپس از سیستم عدسی عدسی شیئی عبور می کند تا به نقطه بسیار کوچکی در صفحه کانونی نمونه همگرا شود. بسته به دیافراگم عددی عدسی شیئی، قطر درخشان ترین نقطه نورانی حدود 0}.25 ~ 0.8μm و عمق آن در حدود 0.5 تا 1.5μm است. . اندازه نقطه کانونی به طراحی میکروسکوپ، طول موج لیزر، ویژگی‌های عدسی شیئی، تنظیمات وضعیت واحد اسکن و ویژگی‌های نمونه بستگی دارد. محدوده روشنایی و عمق روشنایی یک میکروسکوپ میدانی زیاد است، در حالی که نور یک میکروسکوپ کانفوکال روی تمرکز دقیق روی صفحه کانونی متمرکز است. اساسی‌ترین مزیت میکروسکوپ کانفوکال این است که می‌تواند برش نوری دقیق نمونه‌های فلورسنت ضخیم را انجام دهد (که می‌تواند به 50 میکرومتر یا بیشتر برسد)، و ضخامت برش‌ها حدود ۰.۵ تا ۱.۵ میکرومتر است. تصاویر بخش نوری سریال را می توان با حرکت دادن نمونه به بالا و پایین با استفاده از یک موتور پله ای محور Z میکروسکوپ پیچیده به دست آورد. مجموعه اطلاعات تصویر در یک صفحه دقیق بدون تداخل سیگنال های ساطع شده از مکان های دیگر روی نمونه کنترل می شود. پس از حذف تاثیر فلورسانس پس‌زمینه و افزایش نسبت سیگنال به نویز، کنتراست و وضوح تصاویر هم کانونی به طور قابل‌توجهی در مقایسه با تصاویر فلورسانس سنتی با نور میدان بهبود یافته است. در بسیاری از نمونه‌ها، بسیاری از اجزای ساختاری پیچیده برای تشکیل سیستم‌های پیچیده در هم تنیده شده‌اند، اما زمانی که بتوان بخش‌های نوری کافی را جمع‌آوری کرد، می‌توانیم آن‌ها را در سه بعدی از طریق نرم‌افزار بازسازی کنیم. این روش تجربی به طور گسترده در تحقیقات بیولوژیکی برای روشن کردن روابط پیچیده ساختاری و عملکردی بین سلول ها یا بافت ها استفاده شده است.