افزایش مزایای میکروسکوپ چند فوتونی اسکن لیزری

افزایش مزایای میکروسکوپ چند فوتونی اسکن لیزری

میکروسکوپ چند فوتونی اسکن لیزری یک پیشرفت بزرگ نسبت به میکروسکوپ نوری است. می‌تواند ساختار عمیق سلول‌های زنده، سلول‌ها و بافت‌های ثابت را مشاهده کند و می‌تواند ساختارهای صفحه Z چندلایه واضح و تیز، یعنی بخش‌های نوری را به‌دست آورد، که می‌تواند ساختار جامد سه‌بعدی نمونه را بسازد. میکروسکوپ کانفوکال از یک منبع نور لیزری استفاده می کند که پس از انبساط، کل صفحه کانونی پشتی عدسی شیئی را پر می کند و سپس از سیستم عدسی عدسی شیئی عبور می کند تا به نقطه بسیار کوچکی در صفحه کانونی نمونه همگرا شود. بسته به دیافراگم عددی عدسی شیئی، قطر روشن ترین نقطه روشنایی حدود 0}.25 ~ 0.8μm و عمق آن در حدود 0.5 تا 1.5μm است. . اندازه نقطه کانونی به طراحی میکروسکوپ، طول موج لیزر، ویژگی‌های عدسی شیئی، تنظیمات وضعیت واحد اسکن و ویژگی‌های نمونه بستگی دارد. میکروسکوپ میدانی دارای محدوده و عمق روشنایی زیادی است، در حالی که میکروسکوپ کانفوکال دارای یک نور متمرکز متمرکز بر یک نقطه کانونی در صفحه کانونی است. اساسی‌ترین مزیت میکروسکوپ کانفوکال این است که می‌تواند برش نوری دقیق نمونه‌های فلورسنت ضخیم را انجام دهد (که می‌تواند به 50 میکرومتر یا بیشتر برسد)، و ضخامت بخش‌ها حدود ۰.۵ تا ۱.۵ میکرومتر است. با استفاده از موتور پله ای محور Z میکروسکوپ، می توان یک سری تصاویر بخش نوری را با حرکت نمونه به بالا و پایین به دست آورد. کسب اطلاعات تصویر در داخل صفحه کنترل می شود و سیگنال های ساطع شده از مکان های دیگر روی نمونه تداخلی نخواهد داشت. پس از حذف تاثیر فلورسانس پس‌زمینه و افزایش نسبت سیگنال به نویز، کنتراست و وضوح تصاویر هم کانونی به طور قابل‌توجهی در مقایسه با تصاویر فلورسانس سنتی با نور میدان بهبود یافته است. در بسیاری از نمونه‌ها، بسیاری از اجزای ساختاری پیچیده برای تشکیل سیستم‌های پیچیده در هم تنیده شده‌اند، اما زمانی که بتوان بخش‌های نوری کافی را جمع‌آوری کرد، می‌توانیم آن‌ها را در سه بعدی از طریق نرم‌افزار بازسازی کنیم. این روش تجربی به طور گسترده در تحقیقات بیولوژیکی برای روشن کردن روابط پیچیده ساختاری و عملکردی بین سلول ها یا بافت ها استفاده شده است.