تفاوت ها و مزایا و معایب بین میکروسکوپ فلورسانس انتقالی و میکروسکوپ فلورسانس بازتابی

تفاوت ها و مزایا و معایب بین میکروسکوپ فلورسانس انتقالی و میکروسکوپ فلورسانس بازتابی

1. میکروسکوپ فلورسانس انتقال: منبع نور تحریک از طریق ماده نمونه از طریق کندانسور برای تحریک فلورسانس منتقل می شود. متمرکز کننده های میدان تاریک معمولی یا متمرکز کننده های معمولی را می توان برای تنظیم بازتابنده برای تبدیل نور تحریک و نور جانبی به نمونه استفاده کرد. این یک میکروسکوپ فلورسانس نسبتا قدیمی است. مزیت آن فلورسانس قوی در بزرگنمایی کم است، در حالی که عیب آن این است که فلورسانس آن با افزایش بزرگنمایی ضعیف می شود. بنابراین برای مشاهده نمونه های بزرگتر بهتر است.

2. میکروسکوپ فلورسانس پرتو سقوطی: این نوع جدیدی از میکروسکوپ فلورسانس است که در دوران مدرن توسعه یافته است. بر خلاف مورد قبلی، نور تحریک از لنز شیئی به سطح نمونه می‌افتد و از همان عدسی شیئی به عنوان کندانسور روشنایی و عدسی شیئی برای جمع‌آوری فلورسانس استفاده می‌کند. یک جداکننده پرتو دو رنگ باید به مسیر نوری اضافه شود که زاویه 45 درجه را با فوتورانیوم تشکیل می دهد. نور تحریک به عدسی شیئی منعکس می شود و روی نمونه جمع می شود. فلورسانس تولید شده توسط نمونه و نور تحریک منعکس شده از سطح عدسی شیئی و شیشه پوششی به طور همزمان وارد عدسی شیئی شده و به جداکننده پرتو دو رنگی باز می گردد و نور تحریک و فلورسانس را از هم جدا می کند. سپس نور تحریک باقیمانده توسط فیلتر مسدود کننده جذب می شود. اگر از ترکیبات مختلف فیلترهای تحریک، جداکننده پرتو دو رنگ و فیلترهای مسدود کننده استفاده شود، می توانند نیازهای محصولات مختلف واکنش فلورسنت را برآورده کنند. از مزایای این میکروسکوپ فلورسنت می توان به نور میدان دید یکنواخت، تصویربرداری واضح و فلورسانس قوی تر با بزرگنمایی بیشتر اشاره کرد.
مزایا و معایب میکروسکوپ فلورسانس انتقالی

منبع نور: لامپ جیوه ای فشار قوی یا لامپ هالوژن.

آینه نورافکن: استفاده از نورافکن میدان تاریک برای جداسازی تحریک و فلورسانس.

عدسی شیئی: از هر نوع عدسی شیئی می توان استفاده کرد.

نمونه: نمونه های نازک برای مشاهده انتقال مناسب ترند.

مزایا: ① به دلیل استفاده از یک کندانسور میدان تاریک، نور تحریک نمی تواند وارد عدسی شیئی شود و تشکیل پس زمینه تاریک و دستیابی به کنتراست خوب را آسان می کند و از هر عدسی شیئی می توان برای مشاهده استفاده کرد. ② هنگام استفاده از یک هدف با بزرگنمایی کم، روشن تر از یک میکروسکوپ فلورسانس بازتابی است.

نقطه ضعف: مرکز و ارتفاع نورافکن باید به درستی تنظیم شود، در غیر این صورت نمی توان یک تصویر فلورسنت روشن به دست آورد. به دلیل محدودیت فاصله کانونی نورافکن میدان تاریک، نمی توان از اسلایدهای شیشه ای ضخیم استفاده کرد. ناحیه روشنایی میدان دید نباید خیلی بزرگ باشد، در غیر این صورت ممکن است باعث محو شدن رنگ فلورسانس نمونه فلورسنت شود. نمونه های ضخیم یا مات مناسب نیستند.

مزایا و معایب میکروسکوپ فلورسانس بازتابی
منبع نور: لامپ جیوه ای فشار قوی یا لامپ هالوژن.

لنز فوکوس کننده: از آنجایی که لنز شیئی به عنوان لنز فوکوس کننده عمل می کند، نیازی به لنز فوکوس نیست.

عدسی شیئی: عدسی شیئی مورد استفاده باید بتواند نور فرابنفش کافی را منتقل کند و خود فلورسانس تولید نکند، بدون محدودیت دیافراگم عددی.

نمونه: هر دو نمونه ضخیم و مات را می توان مشاهده کرد.

مزایا: ① از آنجایی که لنز شیئی به عنوان نورافکن نیز عمل می کند، نیازی به تنظیم زیادی ندارد. ② با استفاده از روش روشنایی کولار، می توان از اثرات دیافراگم و دیافراگم های میدان دید استفاده کرد. دیافراگم عددی لنز شیئی محدود نیست و همچنین می توان تصاویری با وضوح بالا با بزرگنمایی بالا به دست آورد. نمونه های ضخیم یا مات نیز می توانند مشاهده می شود و می توان از لغزش های پوشش ضخیم نیز استفاده کرد سایر روش های مشاهده نیز می توانند با فلورسانس منعکس شده ترکیب شوند، به خصوص با روش اختلاف فاز و روش تداخل دیفرانسیل انتقال می توان از پدیده محو شدن رنگ فلورسانس غیر ضروری جلوگیری کرد.

عیب: هنگام استفاده از یک هدف بزرگنمایی زمین، تصویر نسبتا تاریک است، بنابراین باید از یک شیئ با دیافراگم عددی بالا استفاده شود. سیستم فیلتر باید به طور موثر لومینسانس تحریک و فلورسانس را از هم جدا کند.