تعیین تعداد میکروارگانیسم ها-روش شمارش مستقیم میکروسکوپی!

تعیین تعداد میکروارگانیسم ها-روش شمارش مستقیم میکروسکوپی!

رشد جمعیت باکتریایی با افزایش تعداد سلول یا افزایش مواد سلولی آشکار می شود. روش‌های تعیین تعداد سلول‌ها شامل شمارش میکروسکوپی مستقیم، شمارش صفحات، تخمین کدورت توسط اسپکتروفتومتر، تعداد محتمل MPN و فیلتراسیون غشایی است. (فیلتراسیون غشایی) و غیره روشهای اندازه گیری مواد سلولی شامل تعیین وزن خشک سلول، تعیین برخی اجزای سلولی مانند محتوای نیتروژن، محتوای RNA و DNA و تعیین محصولات متابولیت می باشد. به طور خلاصه، روش های زیادی برای اندازه گیری رشد میکروبی وجود دارد که هر کدام مزایا و معایب خاص خود را دارند. روش باید با توجه به نیازهای خاص کار انتخاب شود. این آزمایش عمدتاً روش شمارش مستقیم میکروسکوپی را معرفی می کند که معمولاً در کارهای تولیدی و تحقیقات علمی استفاده می شود.

1. الزامات هدف
1. اصل شمارش را با تابلوی گلبول شمارش روشن کنید.
2. بر روش شمارش میکروارگانیسم ها با استفاده از تخته شمارش سلول های خونی مسلط شوید.

2. اصول اولیه
روش شمارش مستقیم میکروسکوپی روشی ساده، سریع و شهودی است که مقدار کمی از سوسپانسیون نمونه مورد آزمایش را بر روی یک لام مخصوص با مساحت و حجم تعیین شده (که به آن باکتریومتر نیز می گویند) قرار می دهد و مستقیماً زیر میکروسکوپ شمارش می کند. مواد و روش ها. در حال حاضر، باکتری‌سنج‌های رایج در داخل و خارج از کشور عبارتند از: هموسیتومتر، باکتری‌سنج پیتروف هاوزر، و باکتری‌سنج هاکسلی و غیره که همگی برای شمارش مخمر، باکتری، هاگ‌های کپک و سایر سوسپانسیون‌ها قابل استفاده هستند و اصول اولیه یکسان است. دو عدد شمارنده باکتری آخری دارای حجم کلی 0 هستند.02 میلی متر مکعب پس از پوشاندن با یک شیشه پوششی، و فاصله بین شیشه پوشش و لام فقط 0.02 میلی متر است. بنابراین، می توان از یک لنز شیئی غوطه ور در روغن برای مشاهده و تشخیص سلول های کوچکتر مانند باکتری ها استفاده کرد. شمردن. علاوه بر استفاده از این باکتری‌سنج‌ها، یک روش تخمینی نیز وجود دارد که مستقیماً نسبت سطح اسمیر به ناحیه میدان بینایی را در زیر میکروسکوپ مشاهده می‌کند. این روش عموماً برای بررسی باکتریولوژیکی شیر استفاده می شود. مزایای روش شمارش مستقیم میکروسکوپ این است که کار با آن بصری، سریع و آسان است. اما عیب این روش این است که نتیجه اندازه گیری شده معمولاً مجموع باکتری های مرده و باکتری های زنده است. در حال حاضر روش‌هایی برای غلبه بر این نقص وجود دارد، مانند ترکیب باکتری‌های زنده، رنگ‌آمیزی کشت ریز محفظه (مدت کوتاه) و افزودن بازدارنده‌های تقسیم سلولی برای دستیابی به هدف شمارش تنها باکتری‌های زنده.

این آزمایش از یک هموسیتومتر به عنوان مثال برای انجام شمارش مستقیم زیر میکروسکوپ استفاده می کند. برای استفاده از دو باکتری‌سنج دیگر، لطفاً به دستورالعمل‌های هر سازنده مراجعه کنید. شمارش مستقیم زیر میکروسکوپ با استفاده از هموسیتومتر یک روش رایج شمارش میکروبی است. تخته شمارش یک اسلاید ویژه با چهار شیار است که سه سکو را تشکیل می دهد. سکوی پهن تر در وسط توسط یک شیار افقی کوتاه به دو نیمه تقسیم می شود و در هر طرف سکو یک شبکه شبکه ای وجود دارد. هر شبکه مربع به 9 مربع بزرگ تقسیم می شود و مربع بزرگ در وسط اتاق شمارش است. ساختار تخته شمارش سلول های خونی در شکل {0}} نشان داده شده است. به طور کلی دو مشخصات برای مقیاس اتاق شمارش وجود دارد. یکی یک مربع بزرگ است که به 25 مربع متوسط ​​تقسیم می شود و هر مربع متوسط ​​به 16 مربع کوچک تقسیم می شود (شکل 15-2). دیگری یک مربع بزرگ است. شبکه مربع به 16 مربع متوسط ​​و هر مربع متوسط ​​به 25 مربع کوچک تقسیم می شود. با این حال، مهم نیست که چه نوع تخته شماری است، در هر مربع بزرگ 400 مربع کوچک وجود دارد. طول ضلع هر مربع بزرگ lmm است، سپس مساحت هر مربع بزرگ lmm2 است. پس از پوشاندن لغزش پوشش، ارتفاع بین لغز پوشش و لام 0.lmm است، بنابراین حجم محفظه شمارش 0.lmm3 (یک ده هزارم میلی‌لیتر) است. Figure 15-1 Structure of the blood counting board (1) Figure 15-2 Structure of the blood counting board (2) A. view front; ب. مقطع طولی; شبکه مربع بزرگ شده، مربع بزرگ در وسط اتاق شمارش 1 است. تخته شمارش سلول های خون. 2. لغزش پوشش; 3. هنگام شمارش در محفظه شمارش، معمولاً تعداد کل باکتری ها را در پنج مربع بشمارید، سپس مقدار میانگین هر مربع را بیابید و سپس در 25 یا 16 ضرب کنید تا تعداد کل باکتری ها در یک مربع بزرگ تبدیل شود. به تعداد کل باکتری ها در 1 میلی لیتر محلول باکتریایی. فرض کنید تعداد کل باکتری ها در پنج مربع میانی A و ضریب رقت محلول باکتریایی B باشد. اگر صفحه شمارشی با 25 مربع میانی باشد، تعداد کل باکتری ها در 1 میلی لیتر از محلول باکتریایی {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (قطعه) به همین ترتیب، اگر صفحه شمارش با 16 مربع باشد، تعداد کل باکتری ها در 1 میلی لیتر محلول باکتریایی {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (قطعه)،،