تنظیم سیستم مسیر نوری تصویربرداری میکروسکوپ نوری و طرح کلی معاینه میکروسکوپی
تنظیم سیستم مسیر نوری تصویربرداری و طرح کلی معاینه میکروسکوپی
تنظیم سیستم نوری تصویربرداری یک میکروسکوپ با توجه به نیازهای تکنیک های مختلف میکروسکوپ انجام می شود. بهطور خلاصه، میکروسکوپ، روشی است که در هنگام مشاهده نمونه از طریق میکروسکوپ و تکنیک و روش به دست آوردن کنتراست بهتر در تصویری که نمونه ایجاد میکند، استفاده میشود. در زیر به طور خلاصه توضیح می دهد که میکروسکوپ در چندین روش بالغ شده است و روش تنظیم سیستم نوری تصویربرداری میکروسکوپی مربوطه.
1. میدان روشن انتقال:
این روش سنتی ترین و رایج ترین روش کاربردی از زمان اختراع میکروسکوپ است. اجزای اساسی: الف. عدسی شیئی: هر عدسی شیئی را می توان برای مشاهده میدان روشن استفاده کرد. ب. محدوده لکه بینی: می توان از انواع دوربین های لکه بینی استفاده کرد، ترجیحا مجهز به دیافراگم دیافراگم. روش تنظیم: پس از تنظیم سیستم روشنایی Kuhler میکروسکوپ فوق، می توان روش میدان روشن را اعمال کرد. دامنه کاربرد: کلیه مقاطع بافتی رنگ آمیزی شده، اسمیرهای خونی و غیره. اقدامات احتیاطی: الف. هنگام استفاده از روش مشاهده میدان روشن، سیستم روشنایی کوهلر باید تنظیم شود. ب. دیافراگم میدان دید نباید خودسرانه باز شود و هنگام استفاده از لنزهای شیئی 10×، کمتر از 10× و بیشتر از 10، عدسی جلوی آینه کندانسور باید به ترتیب به صورت واقعی به سمت بیرون و در مسیر نوری قرار گیرد. × ج. دیافراگم دیافراگم آینه کندانسور نباید برای تنظیم روشنایی میدان دید استفاده شود و ارتفاع آینه کندانسور نباید بی رویه تنظیم شود، در غیر این صورت وضوح میکروسکوپ کاهش می یابد و وضوح بافت لکه دار کاهش می یابد. آسیب خواهد دید. وضوح میکروسکوپ و آسیب به سیستم روشنایی کوهلر تنظیم شده است. د برای میکروگراف ها، هر تغییر در استفاده از بزرگنمایی لنز شیئی، باید دیافراگم دیافراگم لنز کندانسور را تنظیم کنید تا اندازه آن دقیقاً برابر با دیافراگم عددی استفاده شده در لنز شیئی 2/3 باشد.
2. روش کنتراست فاز نور عبوری:
این یک بررسی میکروسکوپی مدرن از یک روش افزایش کنتراست است. اجزای اصلی: لنز شیئی کنتراست فاز، میدان دید روشن و محدوده نقطهیابی چند منظوره کنتراست فاز، تلسکوپ فوکوس، فیلترهای سبز رنگ.
روش های تنظیم:
آ. بر اساس تنظیم سیستم روشنایی کوهلر، نمونه را به وضوح با استفاده از روش میدان روشن متمرکز کنید
ب. محدوده لکه بینی را روی Ph1 بچرخانید تا موقعیت مقیاس شماره گیری را تراز کنید، لنز شیئی کنتراست فاز 10 × را انتخاب کنید و نمونه شفافی را که باید مشاهده شود جایگزین کنید.
ج. یکی از چشمی ها را از برق بکشید، آن را با یک تلسکوپ مرکزی جایگزین کنید و روی دو حلقه کنتراست فاز در میدان دید (حلقه کنتراست فاز سیاه رنگ عدسی شیئی و حلقه کنتراست فاز انتقال نور عدسی کندانسور) تمرکز کنید.
د دو حلقه کنتراست فاز در میدان دید ممکن است لزوماً با هم منطبق نباشند، دو دستگاه تنظیم را در محدوده نقطهگذاری تنظیم کنید (تنظیم موقعیت چپ و راست اهرم تنظیم حلقه کنتراست فاز و تنظیم موقعیت جلو و عقب دستگیره اصطکاکی) ، به طوری که حلقه انتقال نور برای جلو و پشت به سمت راست و چپ با حلقه سیاه منطبق شود.
ه. پس از تنظیم، برای مشاهده به چشمی برگردید و فیلتر سبز رنگ را در مسیر نوری فشار دهید تا تصویر کنتراست فاز نمونه را مشاهده کنید.
f. هنگامی که لنزهای شیئی 20× و 40× برای مشاهده وجود دارد، لنز لکه بینی باید در موقعیت Ph2 و در هنگام استفاده از 100 لنز شیئی، لنز لکه بینی باید روی موقعیت Ph3 تنظیم شود.
دامنه کاربرد: برای مشاهده نمونه های شفاف، رنگ نشده یا غیر قابل رنگ آمیزی مانند انواع سلول ها، بافت های زنده، مقاطع بافتی رنگ نشده یا لکه دار، موجودات آبزی و غیره مناسب است.
3. روش کنتراست فاز تداخل دیفرانسیل:
به منظور غلبه بر روش کنتراست فاز مشاهده جزئیات نمونه در اطراف تصویر همراه با هاله، جزئیاتی را که باید دیده می شد پنهان می کند و همچنین نمونه ها یا مقاطع بافتی به ضخامت نسبتاً نازکی نیاز دارند، در اصل، می توان ضخیم تر از 10 متر و سایر محدودیت ها، استفاده از اصل تداخل پرتو دوگانه برای طراحی روش کنتراست فاز تداخل فرعی.
روش های تنظیم:
آ. روش DIC باید بر این اساس تنظیم شود که سیستم Kulemin قبلاً تنظیم شده است
ب. با استفاده از یک لنز شیئی 10×، موقعیت فوکوس لنز شیئی را تعیین کنید که بتواند نمونه را به وضوح با میدان دید روشن ببیند.
ج. پلاریزر را در مسیر روشنایی قرار دهید، توجه داشته باشید که باید در جهت شرق به غرب باشد.
د چرخش کندانسور را در موقعیتی که مربوط به استفاده از عدسی شیئی 10 × یعنی DIC 0 است بچرخانید.3-0.4.
ه. لغزنده DIC را برای لنز شیئی 10× در پشت لنز شیئی یا مبدل شیئی قرار دهید.
f. آنالایزر را در مسیر نوری تصویربرداری قرار دهید و توجه داشته باشید که جهت آن باید از جنوب به شمال باشد.
g. نمونه شفافی که باید مشاهده شود را جایگزین کنید، منبع نور را روشن کنید تا نمونه به وضوح متمرکز شود.
ساعت درج DIC را طوری تنظیم کنید که تصویر کنتراست تداخل دیفرانسیل برای دستیابی به بهترین جلوه، یعنی واضح ترین اثر تسکین، به دست آید.
من. در عین حال دیافراگم دیافراگم آینه کندانسور را تنظیم کنید تا اثر کنتراست نیز بهینه باشد.
j سپس جزئیات نمونه را به دقت تنظیم کنید تا ساختار نمونه را در سطوح مختلف ببینید.
ک. اگر رنگ مکمل (صفحه عقب ماندگی قرمز مرتبه اول) درج شود و درج DIC همزمان تنظیم شود، رنگ های درخشان همیشه در حال تغییر را می توان در میدان دید مشاهده کرد، با قرمز، نارنجی، زرد، سبز، آبی، بنفش، صورتی، صورتی-بنفش و طلایی-زرد. دامنه کاربرد: مقاطع بافتی شفاف یا غیر قابل رنگآمیزی، ضخامت تا حدود 100 متر، بافت زنده و سلولهای زنده در کشت، موجودات زنده کوچک و غیره.
