روش ها و مراحل اشکال زدایی برای میکروسکوپ کنتراست فاز

روش ها و مراحل اشکال زدایی برای میکروسکوپ کنتراست فاز

الف بر اساس تنظیم سیستم روشنایی کوهلر، از روش میدان روشن استفاده کنید تا نمونه را به وضوح متمرکز کنید.

ب نورافکن را روی Ph1 بچرخانید و آن را با خط مقیاس روی میز گردان تراز کنید. یک هدف کنتراست فاز 10 x را انتخاب کنید و آن را با نمونه شفافی که باید مشاهده شود جایگزین کنید.

ج. یکی از چشمی ها را بردارید، آن را با یک تلسکوپ مرکزی جایگزین کنید، و روی دو حلقه کنتراست در میدان دید (حلقه کنتراست سیاه رنگ عدسی شیئی و حلقه کنتراست عبوری عدسی کندانسور) تمرکز کنید.

د دو حلقه متفاوت در میدان دید ممکن است لزوماً با هم مطابقت نداشته باشند. دو دستگاه تنظیم را روی نورافکن تنظیم کنید (تنظیم موقعیت چپ و راست حلقه های اختلاف با میله های تنظیم و دستگیره های نوع اصطکاک برای تنظیم موقعیت جلو و عقب)، به طوری که حلقه شفاف به جلو و عقب حرکت کند تا با حلقه سیاه منطبق شود. ;

ه. پس از تنظیم، به چشمی مشاهده برگردید و فیلتر سبز رنگ را در مسیر نوری فشار دهید تا تصویر اختلاف فاز نمونه را مشاهده کنید.

f. هنگام مشاهده با لنزهای شیئی 20 x و 40 x، نورافکن باید در موقعیت Ph2 و هنگام استفاده از لنز شیئی 100 x، نورافکن باید در موقعیت Ph3 تنظیم شود.

دامنه کاربرد: مناسب برای مشاهده نمونه‌های شفاف، رنگ‌آمیزی یا رنگ‌آمیزی مانند سلول‌های مختلف، بافت‌های زنده، برش‌های بافت بدون رنگ یا لکه‌نشده، موجودات آبزی و غیره.

اصل اساسی میکروسکوپ کنتراست فاز
هنگامی که نور از یک نمونه نسبتا شفاف عبور می کند، تغییر قابل توجهی در طول موج (رنگ) و دامنه (روشنایی) نور ایجاد نمی شود. بنابراین، هنگام مشاهده نمونه های رنگ آمیزی نشده (مانند سلول های زنده) زیر یک میکروسکوپ نوری معمولی، تشخیص مورفولوژی و ساختار داخلی آنها اغلب دشوار است. اما به دلیل تفاوت در ضریب شکست و ضخامت قسمت های مختلف سلول، در هنگام عبور از این نمونه، در مسیر نوری نور مستقیم و پراش شده تفاوت هایی وجود خواهد داشت. با افزایش یا کاهش مسیر نوری، فاز امواج نوری شتاب‌دار یا تأخیر تغییر می‌کند (در نتیجه اختلاف فاز ایجاد می‌شود). تفاوت فاز نور را نمی توان با چشم غیرمسلح احساس کرد، اما میکروسکوپ اختلاف فاز می تواند از دستگاه مخصوص خود - یک روزنه دایره ای و یک صفحه فاز استفاده کند و از پدیده تداخل نور برای تبدیل اختلاف فاز نور به اختلاف دامنه استفاده کند. (تفاوت نور و تاریکی) که با چشم انسان قابل تشخیص است. این امر باعث می‌شود که جسم اصلی شفاف تفاوت‌های روشن و تاریکی را نشان دهد، کنتراست را افزایش می‌دهد و به ما اجازه می‌دهد تا سلول‌های زنده و ساختارهای ظریف خاصی را در داخل سلول‌ها به وضوح مشاهده کنیم که در میکروسکوپ‌های نوری معمولی و میکروسکوپ‌های میدان تاریک دیده نمی‌شوند یا به وضوح دیده نمی‌شوند.

اصل تصویربرداری میکروسکوپ کنتراست فاز: منبع نوری فقط می تواند از یک حلقه شفاف از یک روزنه دایره ای عبور کند که سپس به یک پرتو نور متمرکز می شود. هنگامی که این پرتو نور از جسم مورد آزمایش عبور می کند، به دلیل مسیرهای نوری متفاوت هر قسمت، درجات مختلفی از انحراف (پراش) را تجربه می کند. با توجه به اینکه تصویر تشکیل شده توسط حلقه شفاف با سطح مزدوج روی صفحه فاز و صفحه کانونی پشت عدسی شیئی منطبق است. بنابراین، نور مستقیمی که منحرف نشده است از سطح مزدوج عبور می کند، در حالی که نور پراکنده ای که منحرف شده است از سطح جبران کننده عبور می کند. با توجه به خواص متفاوت سطح مزدوج و سطح جبران بر روی صفحه فاز، به ترتیب اختلاف فاز مشخص و کاهش شدت نور عبوری از این دو قسمت را ایجاد می کنند. سپس دو مجموعه نور از طریق لنز عقب همگرا می شوند و در یک مسیر نوری حرکت می کنند و باعث تداخل بین نور مستقیم و پراش می شوند و اختلاف فاز را به اختلاف دامنه تغییر می دهند. به این ترتیب در حین میکروسکوپ کنتراست فاز، اختلاف فازی که با چشم انسان قابل تشخیص نیست، به اختلاف دامنه (اختلاف روشنایی) تبدیل می شود که توسط چشم انسان از طریق نور جسم شفاف بی رنگ قابل تشخیص است.