چرا بزرگنمایی عدسی روغنی بزرگتر از بزرگنمایی عدسی شیئی معمولی است؟

چرا بزرگنمایی عدسی روغنی بزرگتر از بزرگنمایی عدسی شیئی معمولی است؟

دلایلی که چرا باکتری ها باید قبل از رنگ آمیزی در آزمایشات میکروبیولوژیکی ثابت شوند:

1: سلول ها را می کشد، به راحتی با رنگ رنگ می شود.

2: باکتری ها را به لام شیشه ای بچسبانید و شستن آن با آب آسان نیست.
هنگام تثبیت، باید به آرامی خشک شود. اگر واقعاً می خواهید سرعت بگیرید، می توانید آن را چند بار در فاصله بالای شعله چراغ الکلی خشک کنید. اجازه ندهید لیوان لیوان داغ شود، در غیر این صورت ممکن است شکل زندگی باکتری ها را از بین ببرد.
رنگ آمیزی گرم و مشاهده میکروسکوپی باکتری ها

1. اصل تجربی
اصل رنگ آمیزی گرم: باکتری ها به دلیل ترکیب و ساختار دیواره سلولی خود به رنگ آمیزی گرم واکنش متفاوتی می دهند. دیواره سلولی باکتری های گرم مثبت عمدتاً یک گره شبکه ای است که توسط پپتیدوگلیکان ایجاد می شود. هنگامی که با اتانول درمان می شود، اندازه منافذ ساختار شبکه به دلیل کم آبی کوچکتر می شود و نفوذپذیری کاهش می یابد، به طوری که ترکیب کریستال بنفش-ید این ماده به راحتی قابل شستشو و نگهداری در سلول نیست و آبی- رنگ ارغوانی عامل رنگ‌آمیزی اولیه پس از رنگ‌زدایی و رنگ‌آمیزی همچنان حفظ می‌شود. لایه پپتیدوگلیکان دیواره سلولی باکتری های گرم منفی نازک است و محتوای چربی آن زیاد است، بنابراین وقتی عملیات رنگ زدایی انجام می شود، لیپید توسط اتانول (یا استون) حل می شود و نفوذپذیری دیواره سلولی افزایش می یابد. که کمپلکس کریستال ویولت-ید شسته می شود و پس از رنگ آمیزی با ضد لکه، سلول ها با رنگ قرمز رنگ ضد رنگ آمیزی می شوند. اصل تصویربرداری میکروسکوپی: میکروسکوپ‌های نوری معمولی مدرن از دو سیستم عدسی چشمی و عدسی شیئی برای بزرگ‌نمایی تصویر استفاده می‌کنند، بنابراین اغلب به آنها میکروسکوپ مرکب می‌گویند. در سیستم نوری میکروسکوپ، عملکرد عدسی شیئی حیاتی ترین است و بزرگنمایی عدسی روغنی بیشترین اهمیت را دارد که برای تحقیقات میکروبیولوژیکی مهم ترین است. هدف اصلی از افزودن روغن غوطه‌وری بین لام شیشه‌ای و عدسی افزایش روشنایی نور و افزایش وضوح میکروسکوپ است. از روغن به جای هوا به عنوان وسیله انتقال نور برای کاهش شکست یا بازتاب کلی نور و شفاف‌تر کردن تصویر مشاهده شده استفاده می‌شود.

2. تجهیزات آزمایشی

1. مستعمرات:
کشت اریب مواد مغذی آگار 24 ساعته اشریشیا کلی،
استافیلوکوکوس اورئوس حدود 24 ساعت کشت مایل مواد مغذی آگار، Bacillus subtilis 12-18h کشت مایل مواد مغذی آگار.

2. محلول ها یا معرف ها:
آب مقطر، محلول ید، محلول رنگ‌آمیزی کریستال ویولت، الکل 95 درصد، محلول رنگ‌آمیزی سافرانین، روغن سرو. 3. ابزار:
میکروسکوپ، اسلاید شیشه ای، حلقه تلقیح، لامپ الکلی، موچین، دستمال عدسی.

3. مراحل آزمایشی
a:

1. اسمیر
لام را بیرون بیاورید، لام را مشتعل کنید، الکل روی لام را بسوزانید و آن را استریل کنید، یک قطره آب مقطر در وسط بریزید، از حلقه تلقیح استفاده کنید تا به آرامی مقدار کمی از باکتری را روی محیط کج آزمایش بچینید. لوله، در طول کل فرآیند، دهانه لوله آزمایش باید بالای لامپ الکل باشد و سرعت آن باید سریع باشد تا از آلودگی محیط کشت جلوگیری شود. سپس قطرات کوچک آب را به صورت دایره ای روی لام لیوان بمالید و زمانی که قطرات آب کدر شد آن را متوقف کنید و منتظر بمانید تا خشک شوند و ثابت شوند.

2. رنگرزی اولیه
کریستال ویوله را (مناسب است فقط لایه باکتری را بپوشانید) روی کلنی بریزید، به مدت 1-2 دقیقه رنگ آمیزی کنید، محلول رنگ‌آمیزی را بریزید و با آب ریز از بالای لام بشویید تا محلول آب‌شویه بی‌رنگ شود. و لکه را روی لام قرار دهید. آب روی برش ها را تکان دهید.

3. موردانت
محلول ید را قطره قطره اضافه کنید تا آب باقیمانده شسته شود، حدود 1 دقیقه بپوشانید و با آب بشویید.
4. رنگ زدایی
آب روی لام شیشه را تکان دهید، لام شیشه را کج کنید و 95 درصد الکل اضافه کنید تا رنگ آن را در زیر زمینه سفید تغییر دهید، تا زمانی که الکل خارج شده آبی به نظر نرسد، بلافاصله الکل را با آب بشویید و لام شیشه را بگذارید. آب روی برش ها را بردارید.

5. ضد رنگ آمیزی
حدود 1-2 دقیقه با محلول سافرانین ضد ضربه بزنید، با آب بشویید و سپس با کاغذ جاذب خشک کنید.

6. معاینه میکروسکوپی:

به دنبال کلنی باکتریایی باشید که باید زیر لنز بزرگنمایی کم مشاهده شود (اسلاید را به حرکت درآورید، اگر سایه قرمز را احساس کردید، فورا متوقف شوید، بزرگنمایی را تنظیم کنید، اگر کلنی نیست، به یافتن ادامه دهید)، لوله لنز را بالا بیاورید. و سپس به آینه روغن بروید. یک قطره روغن سدر را به محل نمونه اضافه کنید و بشکه لنز را با احتیاط با تنظیم کننده درشت پایین بیاورید تا لنز روغن در روغن غوطه ور شود و تقریباً نمونه را لمس کند. کندانسور را تا بالاترین موقعیت بالا ببرید و دیافراگم را کاملا باز کنید، از تنظیم کننده درشت استفاده کنید تا بشکه لنز را به آرامی بالا بیاورید تا تصویر جسم در میدان دید ظاهر شود و از تنظیم کننده ریز استفاده کنید تا واضح و فوکوس شود.