برای دیدن شکل سلول های میکروبی از چه نوع میکروسکوپی استفاده می شود

برای دیدن شکل سلول های میکروبی از چه نوع میکروسکوپی استفاده می شود

یک اصطلاح جمعی برای همه موجودات کوچکی که مشاهده آنها با چشم غیر مسلح برای افراد دشوار است. میکروارگانیسم ها شامل باکتری ها، ویروس ها، قارچ ها و چند جلبک هستند. (اما برخی از میکروارگانیسم ها با چشم غیرمسلح قابل رویت هستند، مانند قارچ های متعلق به قارچ ها، گانودرما لوسیدوم و غیره) ویروس ها نوعی "جانداران غیر سلولی" هستند که از اجزای کمی مانند اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها تشکیل شده اند، اما بقا باید به سلول های زنده بستگی داشته باشد. با توجه به محیط های مختلف موجود می توان آنها را به میکروارگانیسم های پروکاریوتی، میکروارگانیسم های فضایی، میکروارگانیسم های قارچی، میکروارگانیسم های مخمری، میکروارگانیسم های دریایی و غیره تقسیم کرد.

نقش و مضرات میکروارگانیسم ها:
یکی از مهمترین تأثیرات میکروارگانیسم ها بر انسان، شیوع بیماری های عفونی است. 50 درصد از بیماری های انسانی توسط ویروس ها ایجاد می شود. تاریخچه میکروب های عامل بیماری انسان، تاریخ مبارزه دائمی انسان با آنهاست. بشر در زمینه پیشگیری و درمان بیماری ها پیشرفت های زیادی داشته است، اما عفونت های میکروبی جدید و در حال ظهور همچنان رخ می دهد، مانند تعداد زیادی از بیماری های ویروسی که فاقد داروهای موثر درمانی هستند. مکانیسم بیماری زایی برخی از بیماری ها مشخص نیست. سوء استفاده از تعداد زیادی از آنتی بیوتیک های طیف وسیع باعث فشار انتخاب شدید شده است و باعث جهش بسیاری از سویه ها شده و منجر به ظهور مقاومت دارویی می شود و سلامت انسان توسط تهدیدات جدید تهدید می شود. برخی از ویروس‌های تقسیم‌بندی شده می‌توانند از طریق ترکیب مجدد یا دسته‌بندی مجدد جهش پیدا کنند. نمونه بارز آن ویروس آنفولانزا است.

پس از دانستن تعریف خاص میکروارگانیسم ها، آزمایشگر هنگام مطالعه میکروارگانیسم ها باید از چه نوع میکروسکوپی برای دیدن استفاده کند و برای دیدن بهتر و مشاهده و تجزیه و تحلیل اشکال رایج میکروبی از چه میکروسکوپی می توان استفاده کرد.

اختراع میکروسکوپ این است که بتواند اشیاء خندان را که با چشم غیر مسلح دیده نمی شوند، ببیند. اندازه میکروارگانیسم ها بسیار کوچک است، بنابراین باید آنها را بزرگ کرد و با کمک میکروسکوپ مشاهده کرد. علاوه بر این، میکروارگانیسم ها انواع مختلفی دارند، بنابراین اساساً اکثر میکروسکوپ های نوری می توانند برای مشاهده میکروارگانیسم ها، سؤال بعدی این است که از چه نوع میکروسکوپی برای مشاهده و تجزیه و تحلیل میکروارگانیسم ها استفاده شود. میکروسکوپ‌های رایج برای مشاهده مورفولوژی میکروبی شامل میکروسکوپ‌های بیولوژیکی، میکروسکوپ‌های کنتراست فاز، میکروسکوپ‌های معکوس، میکروسکوپ‌های فلورسانس و میکروسکوپ‌های کانفوکال هستند. میکروسکوپ و غیره.

در زیر میکروسکوپ‌های مختلفی که برای مشاهده میکروارگانیسم‌ها استفاده می‌شوند، توضیح داده شده است:

1. میکروسکوپ نوری معمولی

نور طبیعی یا نور به عنوان منبع نور استفاده می شود و طول موج آن حدود {0}}.4 میکرومتر است. وضوح میکروسکوپ نصف طول موج یعنی 0.2 میکرومتر و کوچکترین تصویر قابل مشاهده با چشم غیرمسلح 0.2 میلی متر است. بنابراین، استفاده از یک آینه روغنی (غوطه‌وری) برای بزرگ‌نمایی 1000 برابر می‌تواند ذرات 0.2 میکرومتری را به 0.2 میلی‌متر قابل مشاهده با چشم غیر مسلح بزرگ کند. از میکروسکوپ های نوری معمولی می توان برای مشاهده باکتری ها، اکتینومیست ها و قارچ ها استفاده کرد.

2. میکروسکوپ تاریکی معمولاً برای مشاهده مورفولوژی و حرکت میکروبی رنگ نشده استفاده می شود. پس از نصب کندانسور میدان تاریک در میکروسکوپ معمولی، نور نمی تواند مستقیما از وسط نفوذ کند و میدان دید تاریک است. هنگامی که نمونه نور مایل را از لبه کندانسور دریافت می کند، می تواند پراکنده شود، بنابراین میکروارگانیسم های روشن را می توان در پس زمینه میدان تاریک مانند باکتری ها یا اسپیروکت ها مشاهده کرد.

3. میکروسکوپ کنتراست فاز میکروسکوپ کنتراست فاز از اثر نور صفحه اختلاف فاز برای تغییر فاز نور و دامنه نور مستقیم استفاده می کند و اختلاف فاز نور را به اختلاف شدت نور تبدیل می کند. در یک میکروسکوپ کنتراست فاز، زمانی که نور از یک نمونه رنگ‌آمیزی عبور می‌کند، اختلاف فاز نور به دلیل ناهماهنگی چگالی قسمت‌های مختلف نمونه ایجاد می‌شود و مورفولوژی، ساختار داخلی و حالت حرکت میکروارگانیسم‌ها را می‌توان مشاهده کرد.

4. میکروسکوپ فلورسانس میکروسکوپ فلورسانس اساساً همان میکروسکوپ نوری معمولی است، تفاوت اصلی منبع نور، فیلتر و کندانسور است. در حال حاضر بیشتر آنها از دستگاه های اپی لایت استفاده می کنند و معمولاً از لامپ های جیوه ای پرفشار به عنوان منبع نور استفاده می شود که می توانند نور ماوراء بنفش یا آبی-بنفش را ساطع کنند. دو نوع فیلتر وجود دارد: فیلتر تحریک و فیلتر جذب. علاوه بر کندانسورهای میدان روشن عمومی، کندانسورهای میدان تاریک را می توان در میکروسکوپ های فلورسانس با استفاده از نور آبی برای افزایش کنتراست بین فلورسانس و پس زمینه استفاده کرد. این روش برای تشخیص یا شناسایی باکتری های رنگ آمیزی شده با رنگدانه های فلورسنت یا ترکیب شده با آنتی بادی های فلورسنت قابل استفاده است.

5. میکروسکوپ های الکترونی از جریان الکترونی به عنوان منبع نور استفاده می کنند. در مقایسه با نور مرئی، طول موج ده ها هزار بار متفاوت است، که وضوح را تا حد زیادی بهبود می بخشد. سیم پیچ مغناطیسی به عنوان سیستم تقویت نوری استفاده می شود و بزرگنمایی می تواند به ده ها هزار یا صدها هزار بار برسد. اغلب در ذرات ویروس استفاده می شود. و مشاهده فراساختار باکتری.

مشاهده نمونه های میکروبی رنگ نشده:
نمونه های رنگ آمیزی نشده معمولاً می توانند برای مشاهده مورفولوژی، قدرت و حرکت باکتری ها استفاده شوند. باکتری ها در صورت عدم رنگ آمیزی بی رنگ و شفاف هستند و در زیر میکروسکوپ عمدتاً با تفاوت بین ضریب شکست باکتری و محیط اطراف مشاهده می شوند. باکتری های دارای تاژک به شدت حرکت می کنند، در حالی که باکتری های بدون تاژک حرکت براونی نامنظم نشان می دهند. باکتری های زنده مانند ترپونما پالیدوم، لپتوسپیرا و کمپیلوباکتر دارای اشکال و الگوهای حرکتی متمایز هستند که از اهمیت تشخیصی برخوردار هستند. روش های رایج مورد استفاده روش افت فشار، روش افت آویز و روش مویرگی است.

1. روش قطره آویزان دور سوراخ مقعر لام شیشه ای مقعر تمیز وازلین بمالید، یک حلقه از سوسپانسیون باکتریایی را با یک حلقه تلقیح بردارید و در مرکز شیشه پوشش قرار دهید، سپس سوراخ مقعر لام شیشه ای مقعر را با آن تراز کنید. قطره را در مرکز شیشه کاور قرار دهید و درپوش را روی آن قرار دهید، سپس آن را به سرعت برگردانید، لغزش پوشش را به آرامی فشار دهید تا محکم به وازلین لبه سوراخ مقعر بچسبد و سپس زیر یک پرقدرت مشاهده کنید. میکروسکوپ (یا میدان تاریک).

2. یک حلقه از سوسپانسیون باکتریایی را با یک حلقه تلقیح بردارید و به روش افت فشار در مرکز یک لام شیشه ای تمیز قرار دهید و به آرامی روی سوسپانسیون باکتریایی را با شیشه پوششی بپوشانید و مراقب باشید از ایجاد حباب های هوا جلوگیری کنید و از ایجاد حباب های هوا جلوگیری کنید. سوسپانسیون باکتریایی از سرریز شدن مشاهده برایت فیلد (یا میدان تاریک) زیر یک لنز پرقدرت.

3. روش مویرگی عمدتا برای بررسی سینتیک باکتری های بی هوازی استفاده می شود. معمولاً طول 6{3}}~70 میلی‌متر را انتخاب کنید. پس از سیفون کردن سوسپانسیون باکتری های بی هوازی از طریق یک مویرگ با دهانه 0.{4}}.0 میلی متر، دو سر مویرگ را با شعله ببندید. مویرگ روی اسلاید شیشه ای با کاغذ پلاستیکی ثابت شد و زیر یک لنز با قدرت بالا در میدان تاریک مشاهده شد.

مشاهده نمونه های میکروبی رنگ آمیزی شده با میکروسکوپ:
پس از رنگ آمیزی نمونه باکتری، به دلیل تضاد شدید رنگ بین باکتری و محیط اطراف، می توان مشخصات مورفولوژیکی باکتری (مانند اندازه، شکل، آرایش و غیره) باکتری و برخی ساختارهای خاص را مشخص کرد. به وضوح زیر یک میکروسکوپ نوری معمولی (مانند کپسول ها، تاژک ها، هاگ ها و غیره) مشاهده می شود و باکتری ها را می توان با توجه به واکنش رنگ پذیری طبقه بندی و شناسایی کرد.
(1) روش کلی رنگ آمیزی باکتریایی روش کلی رنگ آمیزی باکتریایی عبارت است از: اسمیر (خشک کردن) - تثبیت - رنگ آمیزی.

1. آماده سازی اسمیر خون، ترشحات، دفع، مایع سوراخ کننده و کشت مایع، و لام مستقیم فیلم نازک روی لام های شیشه ای. کالبد شکافی یا بافت های حیوانی آلوده، ضایعه را با یک سواب پنبه ای برای نمونه برداری آغشته کنید. برای تهیه کلونی یا چمن باکتریایی روی محیط جامد، ابتدا از حلقه تلقیح استفاده کنید تا حلقه ای از نرمال سالین را بگیرید و در مرکز لام قرار دهید، سپس از یک حلقه تلقیح استریل برای برداشتن مقدار کمی از کشت و آسیاب استفاده کنید. به طور یکنواخت در نرمال سالین، و آن را روی سطوح رنگ شده بزرگ یا کوچک 1 سانتی متر مربع پخش کنید، بگذارید به طور طبیعی در دمای اتاق خشک شود یا به آرامی در فاصله خشک شود.

2. هدف از تثبیت کشتن باکتری ها، انعقاد پروتئین و ساختار باکتری و تسهیل رنگ آمیزی است. برای جلوگیری از شسته شدن توسط آب در حین شستشو، باکتری ها را به چسبیدن به لام تشویق کنید. تغییر نفوذپذیری باکتری ها به رنگ، که برای ساختار سلول های باکتریایی رنگ آمیزی مفید است. معمولاً با حرارت دادن با شعله ثابت می شود و اسمیر خشک شده به سرعت 3 بار از روی شعله عبور داده می شود. بهتر است هنگام تماس با سرسره، پوست پشت دست نسوزد.

3. رنگرزی با توجه به اهداف مختلف بازرسی، روش های مختلف رنگرزی را برای رنگرزی انتخاب کنید. هنگام رنگ آمیزی، محلول رنگ را به صورت قطره ای اضافه کنید تا پوشش بیشتر شود.

4. Mordant به هر ماده ای که بتواند میل ترکیبی بین رنگ و جسم رنگ شده را افزایش دهد، رنگ را روی جسم رنگ شده ثابت کند و باعث تغییر در نفوذپذیری غشای سلولی شود، موردانت نامیده می شود. معمولاً از آلوم، اسید تانیک، نمک های فلزی و ید و غیره استفاده می شود و از حرارت دادن نیز برای تقویت رنگ استفاده می شود. موردانت ها را می توان بین رنگ آمیزی اولیه و ضد رنگ آمیزی استفاده کرد و همچنین می تواند پس از تثبیت یا در فیکساتور و رنگ آمیزی استفاده شود.

5. رنگ زدایی هر عامل شیمیایی که بتواند رنگ جسم رنگ شده را از بین ببرد، رنگ زدا نامیده می شود. معمولاً از اتانول، استون و غیره به عنوان رنگبردار استفاده می شود. عامل رنگ‌زدایی می‌تواند درجه پایداری ترکیب باکتری‌ها و رنگ‌ها را تشخیص دهد که می‌تواند برای رنگ‌آمیزی افتراقی استفاده شود.

6. ضد رنگ آمیزی باکتری ها یا ساختارهای آنها که رنگ زدایی شده اند اغلب با محلول ضد لکه برای مشاهده آسان رنگ می شوند. رنگ محلول ضد رنگ با محلول رنگرزی اولیه متفاوت است تا کنتراست شدیدی ایجاد کند. رنگ متقابل نباید خیلی قوی باشد تا رنگ لکه اولیه را نپوشاند.