میکروسکوپ فلورسانس دو فوتون چیست؟
اصل اساسی تحریک دو فوتونی این است: در مورد چگالی فوتون بالا، مولکول های فلورسنت می توانند همزمان دو فوتون با طول موج بلند را جذب کنند و پس از یک دوره کوتاه مدت به اصطلاح حالت برانگیخته، فوتونی با طول موج کوتاهتر ساطع کنند. . ; این اثر مانند استفاده از فوتونی است که طول موج آن نصف طول موج بلند است تا یک مولکول فلورسنت را تحریک کند. تحریک دو فوتونی به چگالی فوتون بالایی نیاز دارد. برای آسیب نرساندن به سلول ها، میکروسکوپ دو فوتونی از لیزرهای پالسی با حالت قفل شده با انرژی بالا استفاده می کند. لیزر ساطع شده توسط این لیزر دارای انرژی پیک بالا و انرژی متوسط کم است، عرض پالس آن تنها 100 فمتوثانیه است و فرکانس آن می تواند به 80 تا 100 مگاهرتز برسد. هنگام استفاده از یک لنز شیئی با دیافراگم عددی بالا برای فوکوس فوتون های لیزر پالسی، چگالی فوتون در نقطه کانونی عدسی شیئی بالاترین است و تحریک دو فوتونی فقط در نقطه کانونی عدسی شیئی رخ می دهد. میکروسکوپ دو فوتونی نیازی به سوراخ کانفوکال ندارد که کارایی تشخیص فلورسانس را بهبود می بخشد.
در پدیده های فلورسانس کلی، به دلیل چگالی کم فوتون نور تحریک، یک مولکول فلورسنت می تواند تنها یک فوتون را به طور همزمان جذب کند و سپس یک فوتون فلورسنت را از طریق انتقال تابشی، که فلورسانس تک فوتونی است، ساطع می کند. برای فرآیند تحریک فلورسانس با استفاده از لیزر به عنوان منبع نور، فلورسانس دو فوتون یا حتی چند فوتون ممکن است رخ دهد. در این زمان، شدت منبع نور تحریک مورد استفاده زیاد است و چگالی فوتون الزامات مولکول های فلورسنت را برآورده می کند که همزمان دو فوتون را جذب می کنند. در فرآیند استفاده از لیزر عمومی به عنوان منبع نور تحریک، چگالی فوتون هنوز برای تولید پدیده جذب دو فوتون کافی نیست. معمولاً از لیزر پالسی فمتوثانیه ای استفاده می شود و توان آنی آن می تواند به حد مگاوات برسد. بنابراین، طول موج فلورسانس دو فوتون کوتاهتر از طول موج نور تحریک است، که معادل اثری است که توسط تحریک در نصف طول موج تحریک ایجاد می شود.
