تفاوت بین میکروسکوپ کانفوکال فلورسانس و لیزر چیست؟
میکروسکوپ فلورسانس
1. میکروسکوپ فلورسانس وسیله ای است که از نور ماوراء بنفش به عنوان منبع نور برای روشن کردن جسم مورد آزمایش استفاده می کند و باعث می شود که فلورسانس منتشر کند و سپس شکل و موقعیت جسم را زیر میکروسکوپ مشاهده کند. میکروسکوپ فلورسانس برای مطالعه جذب، انتقال، توزیع و محلی سازی مواد در سلول ها استفاده می شود. برخی از مواد موجود در سلول ها، مانند کلروفیل، پس از قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش می توانند فلورسانس منتشر کنند. برخی از مواد ممکن است خود فلورسانس ساطع نکنند، اما اگر با رنگ های فلورسنت یا آنتی بادی های فلورسنت رنگ شوند، می توانند تحت اشعه ماوراء بنفش نیز فلورسانس منتشر کنند. میکروسکوپ فلورسانس یکی از ابزارهای تحقیقات کمی و کیفی بر روی این مواد است.
2. اصل میکروسکوپ فلورسانس:
(الف) منبع نور: منبع نور نوری با طول موج های مختلف (از ماوراء بنفش تا مادون قرمز) ساطع می کند.
(ب) منبع نور فیلتر تحریک: انتقال نور با طول موج خاصی که می تواند فلورسانس را در نمونه ایجاد کند، در حالی که نوری را که برای فلورسانس تحریک بی فایده است مسدود می کند.
(C) نمونه های فلورسنت: عموماً با رنگدانه های فلورسنت رنگ آمیزی می شوند.
(د) فیلتر مسدود کننده: به طور انتخابی فلورسانس را با مسدود کردن نور تحریکی که توسط نمونه جذب نشده است منتقل می کند و برخی از طول موج ها نیز به طور انتخابی در فلورسانس منتقل می شوند. میکروسکوپی که از نور فرابنفش به عنوان منبع نور برای انتشار فلورسانس از جسم تحت تابش استفاده می کند. میکروسکوپ الکترونی اولین بار توسط Knorr و Harroska در برلین آلمان در سال 1931 مونتاژ شد. این نوع میکروسکوپ به جای پرتو نور از پرتو الکترونی پرسرعت استفاده می کند. با توجه به طول موج بسیار کوتاهتر جریان الکترونی در مقایسه با امواج نور، بزرگنمایی میکروسکوپ الکترونی می تواند به 8{3}}0000 برابر با حداقل حد تفکیک 0.2 نانومتر برسد. میکروسکوپ الکترونی روبشی که در سال 1963 مورد استفاده قرار گرفت، به مردم اجازه می دهد تا ساختارهای ریز روی سطح اجسام را ببینند.
3. دامنه کاربرد: برای بزرگنمایی تصاویر اجسام کوچک استفاده می شود. به طور کلی برای مشاهده زیست شناسی، پزشکی، ذرات میکروسکوپی و غیره استفاده می شود.
میکروسکوپ کانفوکال
1. یک میکروسکوپ کانفوکال یک عدسی نیمه بازتابنده را به مسیر نور منعکس شده اضافه می کند که نور بازتابی را که قبلاً از عدسی عبور کرده است در جهات دیگر خم می کند. یک بافل با یک سوراخ در نقطه کانونی آن وجود دارد و سوراخ کوچک در نقطه کانونی قرار دارد. پشت بافل یک لوله فتو ضربی قرار دارد. می توان تصور کرد که نور منعکس شده قبل و بعد از نقطه کانونی نور تشخیص را نمی توان از طریق این سیستم کانفوکال روی سوراخ کوچک متمرکز کرد و توسط بافل مسدود می شود. بنابراین فتومتر شدت نور منعکس شده را در نقطه کانونی اندازه گیری می کند.
2. اصل: میکروسکوپ های نوری سنتی از منابع نور میدانی استفاده می کنند و تصویر هر نقطه روی نمونه تحت تأثیر پراش یا نور پراکنده از نقاط مجاور قرار می گیرد. میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری از یک پرتو لیزر برای تشکیل یک منبع نور نقطه ای از طریق سوراخ سوزنی روشن استفاده می کند تا هر نقطه در صفحه کانونی نمونه را اسکن کند. نقطه روشن روی نمونه در سوراخ تشخیص تصویربرداری می شود و نقطه به نقطه یا خط توسط یک لوله فتو ضربی (PMT) یا یک دستگاه جفت ترموالکتریک (ccccd) پس از سوراخ تشخیص دریافت می شود و به سرعت یک تصویر فلورسنت بر روی مانیتور کامپیوتر تشکیل می دهد. صفحه نمایش سوراخ روشنایی و سوراخ تشخیص نسبت به صفحه کانونی عدسی شیئی کونژوگه شده اند. نقاط روی صفحه کانونی به طور همزمان روی سوراخ روشنایی و سوراخ سوزنی انتشار متمرکز می شوند و نقاط خارج از صفحه کانونی در سوراخ تشخیص تصویربرداری نمی شوند. این منجر به یک تصویر هم کانونی می شود که نشان دهنده سطح مقطع اپتیکال نمونه است و بر اشکال تار شدن تصاویر در میکروسکوپ معمولی غلبه می کند.
3. زمینه های کاربردی: شامل پزشکی، تحقیقات حیوانی و گیاهی، بیوشیمی، باکتری شناسی، زیست شناسی سلولی، بافت و جنین، علوم غذایی، ژنتیک، فارماکولوژی، فیزیولوژی، اپتیک، آسیب شناسی، گیاه شناسی، علوم اعصاب، زیست شناسی دریایی، علم مواد، علوم الکترونیک، مکانیک، زمین شناسی نفت و کانی شناسی.
