تفاوت بین میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ معکوس چیست؟
در کشت سلولی و آزمایشات مشتقات مرتبط، میکروسکوپ ابزار بسیار مهمی است. در حال حاضر انواع مختلفی از میکروسکوپ ها در بازار وجود دارد. انتخاب میکروسکوپی که نیازها را برآورده کند و قابل اجرا باشد، چالش برانگیز است. در ادامه به معرفی اصول میکروسکوپ معکوس و میکروسکوپ فلورسانس می پردازیم تا بتوانید به راحتی انتخاب کنید.
ترکیب میکروسکوپ معکوس مانند میکروسکوپ معمولی است که عمدتاً شامل سه قسمت است: بخش مکانیکی، بخش روشنایی و بخش نوری.
ترکیب میکروسکوپ معکوس مانند میکروسکوپ عمودی معمولی است، با این تفاوت که عدسی شیئی و سیستم روشنایی معکوس هستند، اولی زیر صحنه و دومی بالای صحنه است.
چنین ساختاری می تواند به طور قابل توجهی فاصله موثر بین سیستم متمرکز کننده روشنایی و صحنه را افزایش دهد که برای قرار دادن اجسام ضخیم تر قابل مشاهده مانند ظروف کشت و بطری های کشت سلولی راحت است (البته اسلایدهای شیشه ای و غیره نیز موجود است). و در عین حال فاصله بین عدسی شیئی و ماده لازم نیست فاصله کاری بین آنها خیلی زیاد باشد.
میکروسکوپ معکوس برای مشاهده میکروارگانیسم ها، سلول ها، باکتری ها، کشت بافت، سوسپانسیون ها، رسوبات و غیره در واحدهای پزشکی و بهداشتی، موسسات آموزش عالی و موسسات تحقیقاتی استفاده می شود. می تواند به طور مداوم روند تولید مثل و تقسیم سلول ها، باکتری ها و غیره را در محیط کشت مشاهده کند و می تواند از هر شکلی در این فرآیند عکس بگیرد.
این به طور گسترده ای در سیتولوژی، انگل شناسی، سرطان شناسی، ایمونولوژی، مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی صنعتی، گیاه شناسی و سایر زمینه ها استفاده می شود.
میکروسکوپ فلورسانس برای مطالعه جذب و انتقال مواد در سلول ها، توزیع و محلی سازی مواد شیمیایی و غیره استفاده می شود.
برای جسم تحت بازرسی، دو راه برای تولید فلورسانس وجود دارد: اتوفلورسانس، که فلورسانس را مستقیماً پس از تابش نور ماوراء بنفش منتشر می کند.
برخی از مواد موجود در سلول ها، مانند کلروفیل، پس از تابش اشعه ماوراء بنفش، اتوفلورسانس تولید می کنند. اگرچه برخی از مواد خود نمی توانند فلورسانس کنند، اما می توانند پس از رنگ آمیزی با رنگ های فلورسنت یا آنتی بادی های فلورسنت پس از تابش اشعه ماوراء بنفش، فلورسانس ثانویه را منتشر کنند.
میکروسکوپ فلورسانس از یک منبع نور نقطه ای با راندمان نوری بالا استفاده می کند تا نوری با طول موج معین (نور فرابنفش 365 نانومتر یا نور آبی بنفش 420 نانومتر) را از طریق سیستم فیلتر به عنوان نور تحریک ساطع کند و پس از برانگیختن مواد فلورسنت موجود در نمونه، فلورسنس مختلف ساطع کند. رنگ ها، سپس مشاهده از طریق بزرگنمایی عدسی شیئی و چشمی انجام می شود.
به این ترتیب، تحت یک پسزمینه کنتراست قوی، حتی اگر فلورسانس بسیار ضعیف باشد، به راحتی قابل تشخیص است و از حساسیت بالایی برخوردار است. این عمدتا برای تحقیقات ساختار سلولی و عملکرد و ترکیب شیمیایی استفاده می شود.
