استفاده از میکروسکوپ فلورسانس: تکنیک ها و مهارت ها
پارامترهای فنی میکروسکوپ فلورسانس 1. چشمی زاویه باز 2. عدسی شیئی آکروماتیک 3. مبدل عدسی شیئی چهار سوراخه 4. دستگاه اپی فلورسنت سیستم تحریک آبی (B) سبز (G) 10لامپ جیوه 0W 5. مکانیزم تنظیم فوکوس درشت و ظریف کواکسیال: تنظیم محدوده فوکوس: 15 میلی متر مقدار شبکه میکرو حرکت: 0.002 میلی متر 6. میز مکانیکی دو لایه محدوده حرکت طولی: 70 میلی متر محدوده حرکت جانبی: 50 میلی متر
از روش مهارتی استفاده کنید
(1) اسلاید شیشه ای
ضخامت اسلاید شیشه ای باید بین 0.8 و 1.2 میلی متر باشد. لام خیلی ضخیم از یک طرف نور بیشتری جذب می کند و از طرف دیگر نمی توان نور تحریک را روی نمونه متمرکز کرد. اسلایدها باید صاف، ضخامت یکنواخت و عاری از اتوفلورسانس آشکار باشند. گاهی اوقات از اسلایدهای شیشه ای کوارتز استفاده می شود.
(2) پوشش شیشه ای
ضخامت شیشه پوشش حدود 0.17 میلی متر، صاف است. برای تقویت نور تحریک می توان از شیشه پوشش تداخلی نیز استفاده کرد که یک شیشه پوششی مخصوص است که با چندین لایه مواد (مانند فلوراید منیزیم) پوشانده شده است که اثرات تداخلی متفاوتی بر نور با طول موج های مختلف دارد که می تواند فلورسانس به آرامی پیش می رود. نور مهیج از آن عبور می کند و منعکس می شود و این نور تحریک منعکس شده نمونه را تحریک می کند.
(3) نمونه
برش های بافت یا سایر نمونه ها نباید خیلی ضخیم باشند. اگر بیش از حد ضخیم باشد، بیشتر نور تحریک در قسمت پایین نمونه مصرف می شود، در حالی که قسمت بالایی که مستقیماً توسط عدسی شیئی مشاهده می شود، به طور کامل برانگیخته نمی شود. علاوه بر این، همپوشانی سلولی یا پوشش ناخالصی، بر قضاوت تأثیر می گذارد.
(4) عامل نصب
معمولاً از گلیسیرین به عنوان یک عامل نصب استفاده می شود که باید فاقد فلورسانس خودکار، بی رنگ و شفاف باشد و روشنایی فلورسانس در pH 8 روشن تر است.{1}}.5 و به راحتی محو نمی شود. بنابراین معمولاً از مخلوط مساوی گلیسرول و محلول بافر کربنات 0.5/mol/l با pH 9.{6}} تا 9.5 به عنوان عامل نصب استفاده می‌شود.
(5) روغن آینه
به طور کلی، هنگام مشاهده نمونه ها با میکروسکوپ های فلورسانس میدان تاریک و لنزهای غوطه وری روغن، باید از روغن غوطه ور استفاده شود. بهتر است از روغن مخصوص غوطه وری غیر فلورسنت استفاده کنید. از گلیسیرین فوق نیز می توان به جای آن استفاده کرد و از پارافین مایع نیز می توان استفاده کرد اما ضریب شکست پایین است که تاثیر کمی بر کیفیت تصویر دارد. نفوذ.
