دو نوع میکروسکوپ فلورسانس با توجه به مسیر نوری آنها وجود دارد:
1. میکروسکوپ فلورسانس انتقال: منبع نور تحریک از طریق آینه کندانسور از طریق ماده نمونه برای تحریک فلورسانس است. معمولاً از کلکتور میدان تاریک استفاده می شود، همچنین می توان از کلکتور معمولی استفاده کرد، بازتابنده را به گونه ای تنظیم کرد که نور تحریک به نمونه عبور کند و دور بزند. این نوع قدیمیتر میکروسکوپ فلورسانس است. مزیت این است که فلورسانس در بزرگنمایی کم قوی است و عیب آن این است که فلورسانس با افزایش بزرگنمایی ضعیف می شود. بنابراین بهتر است مواد نمونه بزرگتر را مشاهده کنید.
2. میکروسکوپ فلورسانس نوع سقوط این نوع جدیدی از میکروسکوپ فلورسانس است که در زمانهای اخیر توسعه یافته است، و تفاوت این است که تحریک نور از عدسی شیئی به سطح نمونه، یعنی همان عدسی شیئی روشنایی متمرکز کننده و مجموعه عدسی شیئی فلورسانس. مسیر نوری باید به جداکننده پرتو دو رنگ اضافه شود که با اورانیوم نور زاویه 45 دارد، نور تحریک به عدسی شیئی منعکس می شود و در نمونه جمع می شود، فلورسانس تولید شده توسط نمونه و شیئی. سطح عدسی لنز، بازتاب سطح شیشه ای پوششی از نور تحریک کننده به عدسی شیئی به طور همزمان و برگشت به جداکننده پرتو دو رنگ، به طوری که نور تحریک و فلورسانس از نور تحریک باقیمانده جدا شده و سپس توسط آن جذب می شود. فیلترهای مسدود کننده اگر فیلتر تحریک متفاوت / جداکننده پرتو دو رنگ / بلوک ترکیبی فیلتر مسدود کننده را تغییر دهید، می تواند نیازهای محصولات مختلف واکنش فلورسانس را برآورده کند. از مزایای این میکروسکوپ فلورسانس میدان دید روشنایی یکنواخت، تصویربرداری واضح است، هر چه بزرگنمایی فلورسانس بیشتر باشد، قوی تر است.
(ب) روش میکروسکوپ فلورسانس.
1. منبع نور، لامپ جیوه بسیار پرفشار را باز کنید تا چند دقیقه پیش گرم شود تا به روشن ترین نقطه برسید.
2. میکروسکوپ فلورسانس انتقال باید بین منبع نور و متمرکز کننده مورد نیاز برای تحریک فیلتر، در پشت عدسی شیئی با فیلتر مسدود کننده مربوطه نصب شود. میکروسکوپ فلورسانس در حال سقوط باید در شکاف مسیر نوری فیلتر تحریک مورد نیاز / جداکننده پرتو دو رنگ / درج فیلتر مسدود کننده قرار داده شود.
3. با عدسی با بزرگنمایی کم رصد کنید و مرکز منبع نور را طوری تنظیم کنید که با توجه به دستگاه تنظیم مدل های مختلف میکروسکوپ فلورسانس در مرکز کل نقطه نورانی قرار گیرد.
4. برش نمونه را قرار دهید، می توان تمرکز را مشاهده کرد. استفاده باید توجه داشته باشید: در پایان نصب فیلترها از چشم برای مشاهده مستقیم استفاده نکنید، به طوری که باعث آسیب به چشم نشود. با یک آینه روغن برای مشاهده نمونه، باید از یک آینه روغن غیر فلورسنت ویژه استفاده کنید. لامپ جیوه پرفشار را نمی توان بلافاصله پس از بسته شدن لامپ باز کرد، باید 5 دقیقه قبل از شروع مجدد، در غیر این صورت ناپایدار خواهد بود و بر عمر لامپ جیوه تأثیر می گذارد.
(ج) مشاهده در زیر میکروسکوپ فلورسانس روی صحنه آموزش با فیلتر نور آبی-بنفش، سلولهای رنگآمیزی شده با o.01% رنگ فلورسنت نارنجی آمیدین را میتوان دید و هسته و سیتوپلاسم سلولها برای تولید دو متفاوت برانگیخته میشوند. رنگ های فلورسانس (سبز تیره و نارنجی-قرمز).
