ساختار ویژه میکروسکوپ فلورسانس شامل موارد زیر است:
(I) سیستم فیلتر رنگ
فیلتر رنگی بخش مهمی از میکروسکوپ فلورسانس است که اجزای اصلی آن توسط فیلتر نور تحریک (فیلتر مانع اول)، فیلتر نور انتشار (فیلتر مانع دوم) و ترکیب نیمه شفاف و نیمه ضد فیلتر (آینه شکافنده پرتو) است. . تولید کنندگان مختلف مدل های فیلتر رنگ، نام اغلب یکنواخت نیست.
1. فیلتر نور تحریک و فیلتر نور انتشار: با توجه به منبع نور و ویژگی های فلوروکروم، معمولاً سه نوع تطبیق زیر را انتخاب کنید تا محدوده طول موج خاصی از نور تحریک را ارائه کنید و نمونه تحریک فلورسانس را از طریق آن انجام دهید. چشمی به تصویربرداری
تحریک UV: فیلتر نور تحریک اجازه انتقال نور UV را می دهد و عبور نور مرئی بالای 400 نانومتر را مسدود می کند. فیلتر انتشار مربوطه اجازه عبور نور آبی را می دهد که در میدان دید آبی به نظر می رسد، به عنوان مثال برای رنگ آمیزی DAPI.
تحریک نور آبی: فیلتر نور تحریک به نور آبی اجازه عبور می دهد و طول موج های دیگر نور را مسدود می کند. فیلتر انتشار مربوطه اجازه عبور نور سبز را می دهد، به عنوان مثال برای نشانگرهای رنگ آمیزی GFP.
تحریک سبز: فیلتر تحریک به نور سبز اجازه عبور می دهد و طول موج های دیگر را مسدود می کند. فیلتر انتشار مربوطه معمولاً به نور قرمز اجازه عبور می دهد، به عنوان مثال رنگ آمیزی رودامین.
2. فیلتر نیمه شفاف و نیمه بازتابنده: نقش آن مسدود کردن کامل تحریک نور از طریق بازتاب است. و از طریق محدوده طول موج متناظر نور ساطع شده. مدل آن و تحریک فیلترهای نور و انتشار فیلترهای نور مطابقت دارد.
(ب) عدسی شیئی و چشمی
انواع لنزهای شیئی را می توان اعمال کرد، اما * انتخاب خوبی از لنز شیئی متقارن و آکروماتیک، به دلیل فلورسانس خودکار آن بسیار کوچک است و خواص انتقال نور (محدوده طول موج) برای فلورسانس مناسب است. از آنجایی که روشنایی فلورسانس تصویر در میدان دید میکروسکوپ با مربع سرعت پوزه شیئ متناسب و با بزرگنمایی آن نسبت معکوس دارد، بنابراین برای بهبود روشنایی تصویر فلورسانس، شیئی با نرخ پوزه بزرگ باید مورد استفاده قرار گیرد. به خصوص برای فلورسانس نمونه به اندازه کافی قوی نیست، باید از نرخ دهان بزرگ، هدف انتقال نور بالا، با حداقل ممکن با چشمی استفاده کنید.
ج) سایر دستگاه های نوری
بازتابنده، لایه بازتابنده آن به طور کلی آلومینیوم اندود است، زیرا آلومینیوم بر روی اشعه ماوراء بنفش و نور مرئی منطقه آبی-بنفش جذب کمتر، بازتاب تا 90٪ یا بیشتر (در حالی که بازتاب نقره تنها 70٪ است). معمولا از بازتابنده های تخت استفاده می شود. آینه نورافکن، طراحی و تولید شده به طور خاص برای میکروسکوپ فلورسانس آینه نورافکن ساخته شده از شیشه کوارتز یا سایر شیشه های شفاف UV. دستگاه نور در حال سقوط که علاوه بر عملکرد منبع نور عبوری، برای نمونه های مات و نیمه شفاف مانند فیلم ضخیم، غشای فیلتر، کلنی، کشت بافت و نمونه های دیگر برای مشاهده مستقیم مناسب تر است. در سال های اخیر، توسعه نوع جدیدی از میکروسکوپ فلورسانس با استفاده از دستگاه نور در حال سقوط، به نام میکروسکوپ فلورسانس سقوط می کند.
(د) منبع نور
امروزه از لامپ جیوه ای پرفشار 50 یا 100 واتی به عنوان منبع نور استفاده می شود. کار توسط تخلیه دو الکترود، ناشی از تبخیر جیوه، فشار هوا به سرعت بالا میرود (این فرآیند معمولاً حدود 5 تا 15 دقیقه طول میکشد)، و در فرآیند انتشار کوانتومهای نور، طول موج نور آزاد شده برای تحریک کافی است. همه انواع مواد فلورسنت، بنابراین، برای میکروسکوپ فلورسانس معمولا استفاده می شود.
لامپ های جیوه ای عمر مفید نسبتاً کوتاهی دارند، معمولاً 200 ساعت، و در پاسخ به این محدودیت عمر مفید، در سال های اخیر، یک منبع نور فلورسنت جدید، X-Cite، به طور گسترده ای برای عمر طولانی لامپ 2000 ساعت و استفاده انعطاف پذیر آن استفاده شده است. - نیازی به پیش گرم کردن نیست و بلافاصله از جعبه آماده استفاده است.
