اصل و ویژگی های ساختاری میکروسکوپ فلورسانس

اصل و ویژگی های ساختاری میکروسکوپ فلورسانس

میکروسکوپ فلورسانس از نقطه ای با راندمان نوری بالا برای ساطع طول موج مشخصی از نور (مانند نور ماوراء بنفش 3650 اینچ یا نور آبی بنفش 4200 اینچ) از طریق یک سیستم فیلتر رنگی به عنوان نور تحریک استفاده می کند و مواد فلورسنت موجود در نمونه را برای انتشار مختلف تحریک می کند. رنگ های فلورسانس پس از آن، از طریق بزرگنمایی عدسی شیئی و چشمی مشاهده می شود. به این ترتیب، تشخیص آن حتی زمانی که فلورسانس در یک پس زمینه قوی بسیار ضعیف است، با حساسیت بالا آسان است. این عمدتا برای مطالعه ساختار و عملکرد سلول و همچنین ترکیب شیمیایی استفاده می شود. ساختار اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس از یک میکروسکوپ نوری معمولی به همراه لوازم جانبی مانند منبع نور فلورسنت، فیلتر تحریک، جداکننده پرتو دو رنگ و فیلتر مسدود کننده تشکیل شده است. منابع نور فلورسنت معمولاً از لامپ های جیوه ای با فشار بسیار بالا (50-200 W) استفاده می کنند که می توانند نور با طول موج های مختلف ساطع کنند. با این حال، هر ماده فلورسنت دارای طول موج نور تحریکی است که قوی‌ترین فلورسانس را تولید می‌کند، بنابراین فیلترهای تحریک (معمولاً فیلترهای تحریک ماوراء بنفش، بنفش، آبی و سبز) باید اضافه شوند تا تنها به طول موج خاصی از نور تحریک اجازه نفوذ و تابش را بدهد. نمونه، در حالی که تمام نورهای دیگر را جذب می کند. پس از تابش نور تحریک، هر ماده فلورسانس مرئی طولانی تر از طول موج تابش را در مدت زمان بسیار کوتاهی ساطع می کند. فلورسانس دارای ویژگی است و به طور کلی ضعیف تر از نور تحریک است. به منظور مشاهده فلورسانس خاص، لازم است که در پشت عدسی شیئی مسدود کننده (یا سرکوب) اضافه شود و از آن به صورت ترکیبی استفاده شود.

تفاوت بین میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ معمولی
1. روش روشنایی معمولاً از نوع پرتوی سقوطی است که در آن منبع نور از طریق یک عدسی شیئی بر روی نمونه تابیده می شود.
2. منبع نور، نور فرابنفش است، با طول موج کوتاهتر و وضوح بالاتر از میکروسکوپ های معمولی.
3. دو فیلتر مخصوص وجود دارد، یکی در جلوی منبع نور برای فیلتر کردن نور مرئی و دیگری بین چشمی و عدسی شیئی برای فیلتر کردن اشعه ماوراء بنفش برای محافظت از چشم انسان استفاده می شود.

میکروسکوپ فلورسانس نیز نوعی میکروسکوپ نوری است که تفاوت اصلی آن در طول موج های مختلف تحریک است. این تفاوت در ساختار و استفاده بین میکروسکوپ فلورسنت و میکروسکوپ نوری معمولی را تعیین می کند.

میکروسکوپ فلورسانس یک ابزار اساسی برای سیتوشیمی ایمونوفلورسانس است. از اجزای اصلی مانند منبع نور، سیستم صفحه فیلتر و سیستم نوری تشکیل شده است. از طول موج خاصی از نور برای برانگیختن نمونه برای انتشار فلورسانس استفاده می‌کند و آن را از طریق یک لنز شیئی و سیستم چشمی بزرگ‌نمایی می‌کند تا تصویر فلورسانس نمونه را مشاهده کند.