روش تهیه اسلایدهای میکروسکوپی

روش تهیه اسلایدهای میکروسکوپی

1. روش اسمیر
روش لکه گیری روشی برای تهیه لام با پوشش یکنواخت مواد بر روی آنها است.
مواد اسمیر شامل ارگانیسم‌های تک سلولی، جلبک‌های کوچک، خون، محیط کشت باکتریایی، بافت‌های شل حیوانات و گیاهان، بیضه‌ها، بساک‌ها و غیره است.

هنگام لکه گیری باید به موارد زیر توجه کرد:

(1) اسلاید شیشه ای باید تمیز شود.

(2) اسلاید شیشه ای باید صاف باشد.

(3) پوشش باید یکنواخت باشد. قطره را در سمت راست وسط لام شیشه ای بمالید و با تیغه یا خلال دندان آن را به طور مساوی پخش کنید.

(4) پوشش باید نازک باشد. با استفاده از لام شیشه ای دیگر به عنوان لام، به آرامی از راست به چپ در امتداد سطح لام شیشه ای با مایع اعمال شده فشار دهید (زاویه بین دو لام باید 30 درجه تا 45 درجه باشد) و یک لایه نازک یکنواخت بمالید.

(5) ثابت شد. در صورت نیاز به تثبیت، می توان از فیکساتورهای شیمیایی یا روش های خشک کردن (باکتری) برای تثبیت استفاده کرد.

(6) رنگ آمیزی. باکتری ها از متیلن بلو استفاده می کنند و خون از محلول رنگ آمیزی رایت استفاده می کند. محلول رنگ آمیزی باید کل سطح پوشش را بپوشاند.

(7) آبکشی کنید. برای جذب یا خشک کردن از کاغذ جاذب استفاده کنید.

(8) فیلم را مهر و موم کنید. نگهداری طولانی مدت با استفاده از فیلم درخت کانادایی

2. روش پرس تبلت
روش فشرده سازی روشی برای برش دادن مواد بیولوژیکی با قرار دادن آنها بین یک لام شیشه ای و یک پوشش و اعمال فشار معین برای پراکندگی سلول های بافتی است.

روند کلی روش پرس تبلت:

(1) انتخاب مواد. برای مشاهده تقسیم سلولی، سلول های بافت تازه با تقسیم سلولی شدید باید به عنوان مواد انتخاب شوند. مانند نوک ریشه، مریستم نوک ساقه، سلول های مغز استخوان، بساک (سلول های مادر گرده). لانه های اسپرم (اسپرماتوسیت ها) و غیره.

(2) ثابت شد. تثبیت مواد را می توان با توجه به نیاز تعیین کرد و نمونه باید بلافاصله فشرده و مشاهده شود. نیازی به انجام درمان تثبیت جداگانه (همزمان با رنگ آمیزی) نیست. اگر مواد بلافاصله پس از نمونه برداری بررسی نشود، می توان آن را با فیکساتور (معمولاً تثبیت کننده الکل اسید استیک) ثابت کرد. پس از تثبیت به مدت 2-24 ساعت (بسته به ماده)، با اتانول 95 درصد شستشو داده و برای استفاده بعدی در اتانول 70 درصد نگهداری کنید.

(3) جدایی. موادی که به راحتی توسط سلول ها پراکنده نمی شوند باید با محلول جداسازی هیدرولیز (مانند HCl 1N یا مایع منی اسید هیدروکلریک) به مدت 6-20 دقیقه درمان شوند. پس از جداسازی باید قبل از رنگ آمیزی با آب شسته شوند.

(4) رنگ آمیزی. انواع مختلفی از رنگ ها وجود دارد. کروموزوم ها معمولاً با محلول رنگ آمیزی اسید استیک سرخابی رنگ آمیزی می شوند.

(5) تبلت را فشار دهید. مواد را روی یک لام شیشه ای قرار دهید، یک قطره آب یا محلول رنگ اضافه کنید، روی لام را با یک پوشش بپوشانید و به آرامی با انگشت شست خود فشار دهید.

(6) رعایت کنید. پس از فشرده سازی، می توان آن را زیر میکروسکوپ مشاهده کرد.