اصول و عناصر ساختاری یک میکروسکوپ فلورسانس
میکروسکوپ فلورسانس از نقطه ای با راندمان نوری بالا برای ساطع نور با طول موج معین (مانند نور فرابنفش 3650 اینچ یا نور آبی بنفش 4200 اینچ) از طریق سیستم فیلتر به عنوان نور تحریک استفاده می کند تا مواد فلورسنت موجود در نمونه را برای انتشار فلورسنس برانگیزد. رنگ های مختلف پس از آن، از طریق بزرگنمایی عدسی شیئی و چشمی مشاهده کنید. به این ترتیب، تحت یک پس‌زمینه کنتراست قوی، حتی اگر فلورسانس بسیار ضعیف باشد، به راحتی قابل تشخیص است و از حساسیت بالایی برخوردار است. این عمدتا برای تحقیقات ساختار سلولی و عملکرد و ترکیب شیمیایی استفاده می شود. ساختار اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس از یک میکروسکوپ نوری معمولی به همراه برخی لوازم جانبی (مانند منبع نور فلورسنت، فیلتر تحریک، تقسیم کننده پرتو دو رنگ و فیلتر مسدود کننده و غیره) تشکیل شده است. منبع نور فلورسنت - معمولاً از لامپ جیوه ای با فشار فوق العاده (50-200 W) استفاده می شود که می تواند نور با طول موج های مختلف ساطع کند، اما هر ماده فلورسنت دارای طول موج تحریکی است که قوی ترین فلورسانس را تولید می کند، بنابراین یک فیلتر تحریک (به طور کلی، فیلترهای تحریک ماوراء بنفش، بنفش، آبی و سبز وجود دارد که تنها به نور تحریکی با طول موج مشخص اجازه عبور داده و تابش نمونه را می دهد، در حالی که نور دیگر را جذب می کند. پس از تابش هر ماده توسط نور تحریک، فلورسانس مرئی با طول موج بیشتر از طول موج تابش در مدت زمان بسیار کوتاهی ساطع می کند. فلورسانس خاص و به طور کلی ضعیف تر از نور تحریک است. به منظور مشاهده فلورسانس خاص، مسدود کردن (یا سرکوب) باید در پشت عدسی شیئی اضافه شود و همراه با آن استفاده شود.
تفاوت بین میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ معمولی
1. روش روشنایی معمولاً اپیسکوپی است، یعنی منبع نور از طریق عدسی شیئی بر روی نمونه تابیده می شود.
2. منبع نور نور ماوراء بنفش است، طول موج کوتاهتر است، و وضوح بالاتر از میکروسکوپ های معمولی است.
3. دو فیلتر مخصوص وجود دارد، یکی در جلوی منبع نور برای فیلتر کردن نور مرئی و دیگری بین چشمی و عدسی شیئی برای فیلتر کردن اشعه ماوراء بنفش برای محافظت از چشم انسان استفاده می شود.
میکروسکوپ فلورسانس نیز نوعی میکروسکوپ نوری است، تفاوت اصلی این است که طول موج تحریک این دو متفاوت است. این تفاوت بین میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ نوری معمولی را از نظر ساختار و کاربرد مشخص می کند.
میکروسکوپ فلورسانس یک ابزار ضروری در سیتوشیمی ایمونوفلورسانس است. از اجزای اصلی مانند منبع نور، سیستم صفحه فیلتر و سیستم نوری تشکیل شده است. استفاده از طول موج مشخصی از نور برای برانگیختن نمونه برای انتشار فلورسانس و مشاهده تصویر فلورسانس نمونه با تقویت عدسی شیئی و سیستم چشمی است.
