استفاده صحیح از میکروسکوپ فلورسانس معکوس
میکروسکوپ فلورسانس معکوس یک میکروسکوپ چند منظوره است که در زمینه تحقیقات علوم زیستی پیشرفته استفاده می شود. ساختار آن پیچیده و گران است. بنابراین، برای اینکه دانشجویان فارغ التحصیل پزشکی به درستی بر استانداردهای عملکرد و استفاده از میکروسکوپ فلورسانس معکوس تسلط پیدا کنند، معلمان باید ابتدا دانش اولیه میکروسکوپ فلورسانس معکوس را قبل از نشان دادن عملکرد واقعی میکروسکوپ فلورسانس معکوس آموزش دهند. آنها باید ساختار، اصل، عملکرد و روشهای اساسی استفاده از میکروسکوپ فلورسانس معکوس را معرفی کنند، و سپس عملکردهای مختلف را برای نمونههای مختلف در عملیات استفاده خاص نشان دهند، و به تدریج عملکرد و استفاده از میکروسکوپ فلورسانس معکوس را برای دانشجویان فارغالتحصیل پزشکی استاندارد کنند.
1. استفاده صحیح از مشاهده بصری. یکی از عملکردهای میکروسکوپ فلورسانس معکوس مشاهده در یک میدان دید روشن است. اصل اساسی آن دستیابی به تصویربرداری در پس زمینه روشن بر اساس جذب نور متفاوت هر قسمت از نمونه پس از روشن شدن توسط نور است. عمدتاً برای مشاهده سلول های رنگی یا رنگی، برش های بافتی و سایر نمونه ها مناسب است.
2. استفاده صحیح از مشاهده دیفرانسیل. دومین عملکرد میکروسکوپ فلورسانس معکوس، مشاهده اختلاف فاز است. اصل اساسی آن تبدیل تفاوت مسیر نوری قسمتهای مختلف نمونه به اختلاف دامنه و مشاهده از طریق یک هدف اختلاف فاز با یک صفحه فاز و یک نورافکن با دیافراگم دایرهای است. این عمدتا برای مشاهده سلول های زنده یا برش های بافت بدون رنگ مناسب است. در فرآیند آموزش تجربی، علاوه بر هدایت صحیح دانشجویان فارغ التحصیل پزشکی به پیروی از روش های عملیاتی اساسی مشاهده اختلاف فاز، راهنمایی آنها برای درک و تسلط بر نمونه ها با استفاده از مشاهده اختلاف فاز اهمیت بیشتری دارد. برای آنها، متداول ترین روش مورد استفاده در تحقیقات علمی آینده، مشاهده میکروسکوپی سلول های کشت شده است. در مرحله اول، برای انتخاب تجهیزات سلولی، به طور کلی توصیه می شود از ظروف کشت، بشقاب ها و بطری های ساخته شده از مواد شیشه ای و پلاستیکی استفاده شود. آنها عمدتاً بی رنگ و شفاف هستند و می توان آنها را مستقیماً در زیر میکروسکوپ فلورسانس معکوس بدون نیاز به ریختن مایع سلولی یا انجام سایر درمان ها مشاهده کرد. ثانیاً، در حین مشاهده میکروسکوپی، برای جلوگیری از آلوده شدن سلولها، درب تجهیزات را به صورت غیر عادی باز نکنید. در نهایت، برای اپراتورها، دستکش، ماسک و کت سفید باید استفاده شود تا نه تنها از سلامت خود محافظت کند، بلکه از آلودگی سلولی نیز جلوگیری کند.
3. استفاده صحیح از مشاهده فلورسانس. سومین عملکرد میکروسکوپ فلورسانس معکوس، مشاهده فلورسانس است. اصل اساسی آن استفاده از نور تحریک برای برانگیختن نمونه برای تولید فلورسانس است و در نتیجه به مشاهده شکل و موقعیت نمونه میرسد. این عمدتا برای مشاهده نمونه های برچسب فلورسانس مناسب است. مشاهده فلورسانس یک عملکرد مهم میکروسکوپ فلورسانس معکوس با لوازم جانبی گران قیمت و استفاده خاص است. برای اینکه دانشجویان فارغ التحصیل پزشکی به درستی بر هنجارهای عملیاتی مشاهده فلورسانس تسلط پیدا کنند، معلمان نه تنها روش های اصلی عمل را به آنها آموزش می دهند، بلکه مهمتر از آن، منحصر به فرد بودن آن را به آنها می آموزند. ابتدا در آماده سازی نمونه، سطح لام و شیشه پوششی صاف و ضخامت مناسب باشد (لاغه باید بین 0.8 میلی متر تا 1.2 میلی متر باشد و شیشه روکش باید حدود {{5 باشد. }}.17 میلی متر)؛ نمونه باید ضخامت مناسبی داشته باشد و در عین حال از همپوشانی سلولی یا پوشاندن ناخالصی اجتناب شود. عامل آب بندی باید از مخلوط مساوی گلیسرول و بافر کربنات استفاده کند ({7}}.5mol/L pH 9.{10}}.5). ثانیاً، قبل از مشاهده فلورسانس، نورهای اتاق و نور سفید میکروسکوپ فلورسانس معکوس باید خاموش شوند تا اطمینان حاصل شود که در یک محیط اتاق تاریک هستند. در نهایت، در مشاهده فلورسانس، زمان مشاهده باید به شدت کنترل شود، معمولاً 1-2 ساعت در هر بار، در غیر این صورت فلورسانس تحلیل میرود و ناپدید میشود. هنگام تنظیم منبع نور، باید از عینک محافظ استفاده کرد تا از آسیب اشعه ماوراء بنفش به عینک جلوگیری شود.
4. استفاده صحیح از تصویربرداری. در تحقیقات علمی، نه تنها لازم است که میکروسکوپ فلورسانس معکوس بتواند مشاهدات متعددی را به دست آورد، بلکه همچنین لازم است که میکروسکوپ فلورسانس معکوس بتواند به تصویربرداری دست یابد. سیستم میکروسکوپ فلورسانس معکوس یک میکروسکوپ نوری را با یک کامپیوتر از طریق تبدیل فوتوالکتریک ترکیب میکند و نه تنها امکان مشاهده میکروسکوپی روی چشمی، بلکه مشاهده پویای تصویر، ویرایش و ذخیرهسازی در رایانه را در زمان واقعی فراهم میکند.
