پارامترهای فنی و مهارت های استفاده از میکروسکوپ فلورسانس

پارامترهای فنی و مهارت های استفاده از میکروسکوپ فلورسانس

پارامترهای فنی میکروسکوپ فلورسانس 1. چشمی زاویه باز 2. عدسی شیئی آکروماتیک 3. مبدل عدسی شیئی چهار سوراخه 4. دستگاه فلورسانس سقوط آبی (B) سبز (G) سیستم تحریک 10لامپ جیوه 0W 5. درشت هم محور مکانیسم فوکوس میکرو: محدوده فوکوس 15 میلی متر مقدار شبکه میکرو 0.002 میلی متر 6. محدوده حرکت طولی میز کار مکانیکی دو لایه: 70 میلی متر محدوده حرکت جانبی: 50 میلی متر
پارامترهای فنی میکروسکوپ فلورسانس
1. چشمی زاویه باز
2. عدسی شیئی آکروماتیک
3. مبدل عدسی شیئی چهار سوراخه
4. سقوط دستگاه فلورسانس آبی (B) سبز (G) سیستم تحریک لامپ جیوه 100 وات
مکانیزم میکرو فوکوس درشت کواکسیال: محدوده فوکوس: 15 میلی متر، مقدار شبکه میکرو: 0.002 میلی متر
6. میز کار مکانیکی دو لایه
محدوده حرکت طولی: 70 میلی متر محدوده حرکت جانبی: 50 میلی متر

نکات و روش های استفاده از میکروسکوپ فلورسانس
(1) اسلاید
ضخامت اسلاید باید بین 0.8 تا 1.2 میلی متر باشد. اگر لام خیلی ضخیم باشد از یک طرف نور زیادی را جذب می کند و از طرف دیگر نمی تواند باعث جمع شدن نور تحریک بر روی نمونه شود. لام باید صاف و تمیز، با ضخامت یکنواخت و بدون فلورسانس خود به خودی قابل توجه باشد. گاهی اوقات اسلایدهای شیشه ای کوارتز مورد نیاز است.

(2) روکش شیشه
ضخامت شیشه پوشش حدود 0.17 میلی متر است و صاف و تمیز است. به منظور افزایش تحریک، می توان از شیشه پوشش تداخلی نیز استفاده کرد. این یک شیشه پوششی ویژه است که با چندین لایه از مواد (مانند فلوراید منیزیم) پوشانده شده است که اثرات تداخلی متفاوتی بر طول موج های مختلف نور دارد. می تواند اجازه دهد فلورسانس به آرامی عبور کند، در حالی که تحریک را منعکس می کند، که می تواند نمونه را تحریک کند.

(3) نمونه
بخش های بافت یا سایر نمونه ها نباید خیلی ضخیم باشند. به عنوان مثال، اگر آنها خیلی ضخیم باشند، بیشتر نور تحریک در قسمت پایینی نمونه مصرف می شود، در حالی که قسمت بالایی که مستقیماً توسط عدسی شیئی مشاهده می شود به اندازه کافی برانگیخته نمی شود. علاوه بر این، همپوشانی سلولی یا پوشاندن ناخالصی می تواند بر قضاوت تأثیر بگذارد.

（4） عامل نصب
گلیسیرین معمولاً به عنوان یک عامل نصب استفاده می شود و باید عاری از فلورسانس خود به خود، بی رنگ و شفاف باشد. روشنایی فلورسانس در pH 8.5 تا 9.5 روشن تر است و به راحتی محو نمی شود. بنابراین معمولاً از مخلوطی معادل گلیسرول و محلول بافر کربنات 0.5/mol/l با pH 9.{7}} تا 9.5 به عنوان عامل نصب استفاده می‌شود.

(5) روغن آینه
به طور کلی، هنگام استفاده از میکروسکوپ فلورسانس میدان تاریک و میکروسکوپ روغن برای مشاهده نمونه ها، استفاده از روغن لنز ضروری است. بهتر است از یک روغن لنز غیر فلورسنت مخصوص استفاده کنید که می تواند با گلیسرول فوق جایگزین شود. از پارافین مایع نیز می توان استفاده کرد، اما ضریب شکست پایین است که تاثیر کمی بر کیفیت تصویر دارد.