ساختار و اجزای اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس

ساختار و اجزای اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس

میکروسکوپ فلورسانس یک ابزار ضروری در سیتوشیمی ایمونوفلورسانس است. از اجزای اصلی مانند منبع نور، سیستم صفحه فیلتر و سیستم نوری تشکیل شده است. استفاده از طول موج مشخصی از نور برای برانگیختن نمونه برای انتشار فلورسانس و مشاهده تصویر فلورسانس نمونه با تقویت عدسی شیئی و سیستم چشمی است.
ساختار و اجزای اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس

(1) منبع نور

امروزه اغلب از لامپ های جیوه ای با فشار 200 وات به عنوان منبع نور استفاده می شود. آنها از شیشه کوارتز با شکل کروی در وسط ساخته شده اند و مقدار مشخصی جیوه در داخل آن پر شده است. در حین کار، تخلیه بین دو الکترود باعث تبخیر جیوه می شود و فشار هوا در توپ به سرعت بالا می رود. هنگامی که جیوه به طور کامل تبخیر شود، می تواند به فشار اتمسفر استاندارد 50-70 برسد و این فرآیند معمولاً حدود 5-15 دقیقه طول می کشد. لومینسانس لامپ جیوه ای با فشار فوق العاده بالا نتیجه تابش کوانتوم های نور در طول تفکیک مداوم و کاهش مولکول های جیوه توسط تخلیه بین الکترودها است. نور ماوراء بنفش و آبی-بنفش قوی ساطع می کند که برای تحریک مواد مختلف فلورسنت کافی است، بنابراین در میکروسکوپ فلورسانس به طور گسترده ای استفاده می شود.

لامپ های جیوه ای با فشار فوق العاده بالا نیز گرمای زیادی از خود ساطع می کنند. بنابراین، خانه چراغ باید شرایط اتلاف گرما خوبی داشته باشد و دمای محیط کار نباید خیلی بالا باشد.

لامپ جدید جیوه ای فشار قوی می تواند بدون ولتاژ بالا در ابتدای استفاده روشن شود. پس از مدتی استفاده، باید با ولتاژ بالا (حدود 15000 ولت) راه اندازی شود. پس از راه اندازی، ولتاژ کار تعمیر و نگهداری معمولاً 50-60 ولت است و جریان کاری حدود 4 آمپر است. متوسط ​​طول عمر یک لامپ جیوه ای 200 واتی با فشار فوق العاده بالا اگر هر بار 2 ساعت استفاده شود حدود 200 ساعت است. هر چه زمان کار کوتاهتر باشد، طول عمر کمتری خواهد داشت. اگر فقط به مدت 20 دقیقه استفاده شود، طول عمر آن 50 درصد کاهش می یابد. بنابراین، هنگام استفاده از آن، تعداد شروع ها را به حداقل برسانید. در طول استفاده از لامپ، اثر نوری آن به تدریج کاهش می یابد. پس از خاموش شدن چراغ، قبل از راه اندازی مجدد، صبر کنید تا خنک شود. لامپ را بلافاصله پس از احتراق خاموش نکنید تا به دلیل تبخیر ناقص جیوه به الکترود آسیبی وارد نشود. معمولاً باید 15 دقیقه صبر کنید. به دلیل فشار بالای لامپ جیوه ای فشار قوی و اشعه ماوراء بنفش قوی، لامپ باید قبل از احتراق در محفظه لامپ قرار داده شود تا در صورت انفجار به چشم ها آسیبی نرساند و باعث کار نشود. .

مدار لامپ جیوه ای فشار قوی (100 وات یا 200 وات) منبع نور و چندین قسمت از جمله ترانسفورماتور، بالاست و استارت. سیستمی برای تنظیم مرکز نورانی لامپ در محفظه لامپ وجود دارد. یک بازتابنده مقعر با روکش آلومینیوم در پشت لامپ و یک لنز جمع‌آوری نور در جلو نصب شده است.

لامپ جیوه ای فشار قوی داخلی GCQ-200 عملکرد خوبی دارد و می تواند جایگزین لامپ های وارداتی مانند HBO-200 شود. میانگین طول عمر بیش از 200 ساعت و قیمت نسبتاً پایین است.

یک دستگاه منبع نور فلورسنت برم تنگستن با دمای رنگ بالا و ساده و قابل حمل که در کشور من ساخته شده است دارای اندازه کوچک، وزن سبک، توان کم، AC و DC دو کاربرد (با منبع تغذیه DC)، حمل آسان، استفاده آسان و دارای رایج و کاربردی شده است.

(2) سیستم فیلتر رنگ

سیستم فیلتر رنگ بخش مهمی از میکروسکوپ فلورسانس است که از یک صفحه فیلتر تحریک و یک صفحه فیلتر پرس تشکیل شده است. مدل صفحه فیلتر و نام هر سازنده اغلب یکنواخت نیست. صفحات فیلتر معمولاً بر اساس رنگ اصلی نامگذاری می شوند، حروف جلو نشان دهنده رنگ، حروف پشت نمایانگر شیشه و اعداد نشان دهنده ویژگی های مدل هستند. میکروسکوپ المپوس

(3) عدسی شیئی

از لنزهای شیئی مختلفی می توان استفاده کرد، اما از عدسی های شیئی آکروماتیک استفاده می شود زیرا فلورسانس خودکار آنها حداقل است و خاصیت انتقال نور آنها (محدوده طول موج) برای فلورسانس مناسب است. از آنجایی که روشنایی فلورسانس تصویر در میدان دید میکروسکوپ با مربع نسبت دیافراگم عدسی شیئی متناسب و با بزرگنمایی آن نسبت معکوس دارد، به منظور بهبود روشنایی تصویر فلورسانس، عدسی شیئی با اندازه بزرگ باید از نسبت دیافراگم استفاده شود. به خصوص در بزرگنمایی بالا تأثیر آن بسیار آشکار است. بنابراین، برای نمونه هایی با فلورسانس ناکافی، باید از یک لنز شیئی با نسبت دیافراگم بزرگ با یک چشمی تا حد امکان استفاده شود (4×، 5×، 6.3×، و غیره).

(4) آینه

لایه بازتابنده بازتابنده عموماً با روکش آلومینیومی است، زیرا آلومینیوم در ناحیه آبی-بنفش نور ماوراء بنفش و نور مرئی کمتر جذب می‌شود و بازتاب آن بیش از 90 درصد است، در حالی که بازتاب نقره تنها 70 درصد است. به طور کلی از یک بازتابنده تخت استفاده می شود.

(5) کندانسور

کندانسورهای طراحی شده برای میکروسکوپ فلورسانس از شیشه کوارتز یا سایر شیشه های شفاف UV ساخته شده اند. دو نوع کندانسور میدان شفاف و کندانسور میدان تاریک وجود دارد. همچنین متمرکز کننده های فلورسانس کنتراست فازی وجود دارد.

(6) دستگاه Epi-light

نوع جدید دستگاه اپی لایت به این صورت است که پس از برخورد نور منبع نور به فیلتر طیف سنجی تداخلی، قسمت طول موج کوتاه (فرابنفش و آبی بنفش) به دلیل خواص پوشش روی فیلتر منعکس می شود. هنگامی که فیلتر رو به منبع نور است، زاویه آن 45 است. وقتی کج می شود، به طور عمودی به سمت عدسی شیئی شلیک می کند و از طریق عدسی شیئی به سمت نمونه شلیک می کند، به طوری که نمونه برانگیخته می شود. در این زمان، عدسی شیئی مستقیماً به عنوان جمع کننده نور عمل می کند. در عین حال قسمت بلند فیلتر (سبز، زرد، قرمز و غیره) نسبت به فیلتر شفاف است، بنابراین در جهت عدسی شیئی منعکس نمی شود و فیلتر به عنوان صفحه فیلتر تحریک عمل می کند. از آنجا که فلورسانس نمونه در ناحیه طول موج بلند نور مرئی است، می تواند از فیلتر عبور کند و برای مشاهده به چشمی برسد، روشنایی تصویر فلورسنت با افزایش بزرگنمایی افزایش می یابد و از نور عبوری قوی تر است. منبع با بزرگنمایی بالا علاوه بر عملکرد منبع نور عبوری، برای مشاهده مستقیم نمونه‌های مات و شفاف مانند برش‌های ضخیم، غشاهای فیلتر، کلنی‌ها و نمونه‌های کشت بافت مناسب‌تر است. میکروسکوپ‌های فلورسانس جدید که در سال‌های اخیر ساخته شده‌اند، بیشتر از دستگاه‌های epi-light استفاده می‌کنند که به آنها میکروسکوپ اپی فلورسانس می‌گویند.