استفاده از میکروسکوپ فلورسانس استریو و اقدامات احتیاطی

استفاده از میکروسکوپ فلورسانس استریو و اقدامات احتیاطی

دستورالعمل ها:

(1) ورق مواد را روی صحنه قرار دهید.

(2) تثبیت کننده ولتاژ میکروسکوپ فلورسنت را روشن کنید. سپس گروه استارت را فشار دهید تا لامپ UV روشن شود و تا 15 دقیقه آن را خاموش نکنید و تا 3 دقیقه بعد از خاموش شدن دوباره آن را روشن نکنید.

(3) فیلتر تحریک را روی v، فیلتر جداسازی رنگ را روی v، و یک فیلتر مسدود کننده 495 یا 475 نانومتری را انتخاب کنید.

(4) میکروسکوپ شیئی فلورسنت uvFL40، uvFL100 را برای بررسی میکروسکوپی انتخاب کنید.

(5) روغن غیر فلورسنت را روی اسلاید اضافه کنید، ابتدا از 40 x استفاده کنید و سپس از میکروسکوپ فوکوس 100 x برای بررسی استفاده کنید. فلورسانس ظاهر می شود.

(7) از آنجایی که فلورسانس مواد فلورسنت با تابش اشعه ماوراء بنفش به تدریج ضعیف می شود، میدان دید باید به طور مکرر در طول بررسی میکروسکوپی تغییر کند.

(8) از میکروسکوپ‌های با بزرگنمایی کم uvFL10 یا uvFL20 نیز می‌توان برای بازرسی مواد استفاده کرد (هنگام استفاده از لنزهای کم مصرف، روغن فلورسنت اضافه نمی‌شود).

روش ضبط تصویر فلورسانس:

تصویر فلورسانس که توسط میکروسکوپ فلورسانس مشاهده می‌شود، هم ویژگی‌های مورفولوژیکی و هم رنگ و روشنایی فلورسانس دارد. هنگام قضاوت در مورد نتایج، این دو باید برای قضاوت جامع ترکیب شوند. نتایج بر اساس شاخص های ذهنی، یعنی مشاهده بصری توسط کارگران، ثبت می شود. به عنوان یک مشاهده کیفی کلی، اساسا قابل اعتماد. با پیشرفت فناوری و علم، از شاخص‌های عینی برای ثبت نتایج قضاوت در درجات مختلف استفاده می‌شود، مانند اسپکتروفتومترهای سلولی، تحلیلگرهای تصویر و سایر ابزارها. با این حال، نتایج ثبت شده توسط این ابزار نیز باید با قضاوت های ذهنی ترکیب شود.

عکاسی با میکروسکوپ فلورسانس برای ثبت تصاویر فلورسانس بسیار ضروری است. از آنجایی که فلورسانس به راحتی محو و ضعیف می شود، لازم است نتایج را در زمان واقعی ثبت کنید. روش اساساً مشابه روش فوتومیکرووگرافی معمولی است. فقط باید از فیلم های حساس به نور با سرعت بالا مانند ASA200 یا بالاتر یا 24. بالاتر استفاده کنید. از آنجایی که نور ماوراء بنفش مانند نشانگرهای FITC تأثیر زیادی بر خاموش کردن فلورسانس دارد، درصورت تابش نور ماوراء بنفش به مدت 30 ثانیه، روشنایی فلورسانس 50 درصد کاهش می یابد. بنابراین، اگر سرعت نوردهی خیلی کم باشد، نمی توان تصویر فلورسنت را گرفت. میکروسکوپ های فلورسانس تحقیقاتی عمومی دارای دستگاه های سیستم فوتومیکرووگرافی نیمه اتوماتیک یا تمام اتوماتیک هستند.

موارد احتیاط:

(1) کاملاً مطابق با الزامات دستورالعمل کارخانه میکروسکوپ فلورسانس عمل کنید و برنامه را به دلخواه تغییر ندهید.

(2) بازرسی باید در یک اتاق تاریک انجام شود. پس از ورود به اتاق تاریک، منبع تغذیه را وصل کنید و لامپ جیوه ای فشار قوی را برای 5-15 دقیقه روشن کنید. پس از ثابت ماندن نور قوی منبع نور، چشم ها کاملاً با اتاق تاریک سازگار می شوند و سپس شروع به مشاهده نمونه می کنند.

(3) برای جلوگیری از آسیب اشعه ماوراء بنفش به چشم، هنگام تنظیم منبع نور باید از عینک محافظ استفاده شود.

(4) زمان بازرسی ترجیحاً هر بار 1-2 ساعت است. اگر از 90 دقیقه بیشتر شود، شدت نور لامپ جیوه فشار بسیار بالا به تدریج کاهش می یابد و فلورسانس ضعیف می شود. پس از تابش نمونه با پرتوهای فرابنفش به مدت 3-5 دقیقه، فلورسانس نیز به طور قابل توجهی ضعیف می شود. بنابراین، حداکثر نباید از 2-2 ساعت تجاوز کند. 3 ساعت

(5) عمر منبع نور میکروسکوپ فلورسانس محدود است و برای صرفه جویی در زمان و محافظت از منبع نور، نمونه ها باید به طور جمعی بازرسی شوند. زمانی که هوا گرم است باید فن هایی اضافه کرد تا گرما از بین برود و لامپ های جدید از ابتدای زمان استفاده ثبت شوند. هنگامی که می خواهید پس از خاموش شدن لامپ دوباره از آن استفاده کنید، قبل از روشن کردن لامپ باید صبر کنید تا لامپ به اندازه کافی خنک شود. از روشن کردن منبع نور چندین بار در روز خودداری کنید.

(6) بلافاصله پس از رنگ آمیزی نمونه را مشاهده کنید، زیرا فلورسانس به تدریج در طول زمان ضعیف می شود. اگر نمونه در کیسه پلاستیکی پلی اتیلن در دمای 4 درجه نگهداری شود، می توان زمان تضعیف فلورسانس را به تاخیر انداخت و از تبخیر عامل نصب جلوگیری کرد.

(7) استاندارد قضاوت روشنایی فلورسانس: به طور کلی به چهار سطح تقسیم می شود، یعنی "یک" - فلورسانس وجود ندارد یا ضعیف است. "به علاوه" - فقط فلورسانس به وضوح قابل مشاهده است. "به علاوه" - قابل مشاهده و روشن است