مهارت ها و روش های استفاده از میکروسکوپ فلورسانس
پارامترهای فنی میکروسکوپ فلورسانس 1. چشمی با زاویه باز 2. هدف آکروماتیک 3. مبدل هدف چهار سوراخه 4. دستگاه فلورسانس ساطع کننده آبی (ب) سبز (g) سیستم تحریک 10لامپ جیوه 0W 5. درشت هم محور مکانیسم میکرو فوکوس: محدوده فوکوس 15 میلی متر، مقدار شبکه ریز 0.002 میلی متر 6. محدوده حرکتی طولی میز کار مکانیکی دو لایه: 70 میلی متر، محدوده حرکت جانبی: 50 میلی متر.
مهارت ها و روش های استفاده از میکروسکوپ فلورسانس
(1) اسلایدهای شیشه ای
ضخامت اسلاید باید بین 0 باشد.8-1.2mm تا 1.2mm. لام خیلی ضخیم از یک طرف نور زیادی را جذب نمی کند و از طرف دیگر نور تحریک را روی نمونه جمع نمی کند. لام باید صاف، ضخامت یکنواخت و عاری از فلورسانس خود به خودی آشکار باشد. گاهی اوقات به اسلایدهای شیشه ای شی یینگ نیاز است.
(2) پوشش شیشه
ضخامت شیشه پوشش حدود 0.17 میلی متر و صاف است. برای تقویت نور تحریک می توان از شیشه پوشش تداخلی نیز استفاده کرد که نوعی شیشه پوششی خاص با چند لایه مواد (مانند فلوراید منیزیم) است که اثرات تداخلی متفاوتی بر طول موج های مختلف نور دارد. می تواند فلورسانس را به آرامی عبور دهد و نور تحریک را منعکس کند و این نور تحریک بازتابی می تواند نمونه را تحریک کند.
(3) نمونه ها
بخش های بافت یا سایر نمونه ها نباید خیلی ضخیم باشند. اگر بیش از حد ضخیم باشد، بیشتر نور تحریک در قسمت پایین نمونه مصرف می شود، در حالی که قسمت بالایی که مستقیماً توسط عدسی شیئی مشاهده می شود به طور کامل برانگیخته نمی شود. علاوه بر این، همپوشانی سلولی یا پوشاندن ناخالصی بر قضاوت تأثیر می گذارد.
(4) عامل آب بندی
گلیسرول معمولاً به عنوان عامل آب بندی استفاده می شود که باید بی رنگ و شفاف بدون فلورسانس خود به خودی باشد. روشنایی فلورسانس در pH 8.5 ~ 9.5 روشن است و به راحتی محو نمی شود. بنابراین، مخلوط معادل گلیسرول و 0.5 مول در لیتر PH9.0 ~ 9.5 بافر کربنات اغلب به عنوان عامل آب بندی استفاده می شود.
(5) روغن آینه
معمولاً هنگام مشاهده نمونه ها با میکروسکوپ فلورسانس میدان تاریک و آینه روغنی باید از روغن آینه استفاده شود. بهتر است از روغن مخصوص آینه غیر فلورسنت استفاده کنید یا به جای آن می توان از گلیسیرین فوق استفاده کرد. از پارافین مایع نیز می توان استفاده کرد، اما ضریب شکست پایین است که تاثیر کمی بر کیفیت تصویر دارد.
