الزامات برای تولید نمونه های میکروسکوپ فلورسنت
(1) سرسره شیشه ای
ضخامت اسلاید باید بین 0.8 و 1.2 میلی متر باشد. اگر لام خیلی ضخیم باشد از یک طرف نور بیشتری را جذب می کند و از طرف دیگر نمی تواند باعث جمع شدن نور تحریک روی نمونه شود. لام باید صاف، ضخامت یکنواخت و عاری از فلورسانس خود به خودی آشکار باشد. گاهی اوقات اسلایدهای شیشه ای کوارتز مورد نیاز است.
(2) اسلاید شیشه ای را بپوشانید
ضخامت شیشه پوشش حدود 0.17 میلی متر است که صاف و تمیز است. به منظور افزایش تحریک، می توان از شیشه پوشش تداخلی نیز استفاده کرد. این یک شیشه پوششی با طراحی خاص با چندین لایه از مواد (مانند فلوراید منیزیم) است که اثرات تداخلی متفاوتی بر طول موج های مختلف نور دارد. می تواند اجازه دهد فلورسانس به آرامی عبور کند، در حالی که تحریک بازتابی می تواند نمونه را تحریک کند.
(3) نمونه
برش های بافت یا سایر نمونه ها نباید خیلی ضخیم باشند، زیرا نور تحریک بیشتر در قسمت پایین نمونه مصرف می شود، در حالی که قسمت بالایی که مستقیماً توسط عدسی شیئی مشاهده می شود کاملاً برانگیخته نمی شود. علاوه بر این، همپوشانی سلولی یا پوشاندن ناخالصی می تواند بر قضاوت تأثیر بگذارد.
(4) عامل آب بندی
گلیسیرین معمولاً به عنوان یک عامل نصب استفاده می شود و باید عاری از فلورسانس خود به خود، بی رنگ و شفاف باشد. روشنایی فلورسانس در pH 8.5 تا 9.5 روشن تر است و به سرعت محو نمی شود. بنابراین معمولاً از مخلوط مساوی گلیسرول و 0.5/mol/l بافر کربنات در pH 9.{7}}.5 به عنوان عامل آب بندی استفاده می شود.
(5) روغن آینه
هنگام مشاهده نمونه ها با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس میدان تاریک و میکروسکوپ روغنی، استفاده از روغن لنز ضروری است. بهتر است از روغن لنز غیر فلورسنت مخصوص ساخته شده استفاده کنید، که می تواند همانطور که در بالا ذکر شد با گلیسرول جایگزین شود. از پارافین مایع نیز می توان استفاده کرد، اما ضریب شکست پایین است و تاثیر کمی بر کیفیت تصویر دارد.
اقدامات احتیاطی برای استفاده از میکروسکوپ فلورسانس
(1) الزامات کتابچه راهنمای کارخانه میکروسکوپ فلورسانس را به شدت دنبال کنید و برنامه را خودسرانه تغییر ندهید.
(2) بازرسی باید در یک اتاق تاریک انجام شود. پس از ورود به اتاق تاریک، منبع تغذیه را وصل کرده و لامپ جیوه ای فشار قوی را به مدت 5 تا 15 دقیقه روشن کنید. پس از اینکه منبع نور نور قوی ساطع کرد و تثبیت شد، چشم ها قبل از شروع به مشاهده نمونه کاملاً با اتاق تاریک سازگار می شوند.
(3) برای جلوگیری از آسیب UV به چشم ها، هنگام تنظیم منبع نور باید از عینک محافظ استفاده شود.
(4) زمان بازرسی باید هر بار 1-2 ساعت باشد. اگر از 90 دقیقه بیشتر شود، شدت نور لامپ جیوه فشار بالا به تدریج کاهش می یابد و فلورسانس ضعیف می شود. پس از قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش به مدت 3-5 دقیقه، فلورسانس نمونه نیز به طور قابل توجهی کاهش یافت. بنابراین، حداکثر نباید از 2-3 ساعت تجاوز کند.
(5) طول عمر منبع نور میکروسکوپ فلورسنت محدود است و برای صرفه جویی در زمان و محافظت از منبع نور، نمونه باید به طور مرکزی بازرسی شود. هنگامی که هوا گرم است، باید یک فن برقی اضافه کرد تا گرما را دفع کند و خنک شود. هنگام تعویض لامپ جدید، زمان استفاده باید از ابتدا ثبت شود. هنگامی که لامپ خاموش می شود و می خواهد دوباره استفاده شود، باید صبر کند تا لامپ کاملاً خنک شود قبل از اینکه مشتعل شود. از احتراق چندباره منبع نور خودداری کنید.
(6) نمونه را بلافاصله پس از رنگ آمیزی مشاهده کنید، زیرا فلورسانس به تدریج در طول زمان کاهش می یابد. اگر نمونه در یک کیسه پلاستیکی پلی اتیلن در دمای 4 درجه نگهداری شود، می تواند زمان تضعیف فلورسانس را به تاخیر بیاندازد و از تبخیر عامل نصب جلوگیری کند.
(7) استاندارد قضاوت برای روشنایی فلورسانس به طور کلی به چهار سطح تقسیم می شود، یعنی "یک" - بدون یا فلورسانس ضعیف قابل مشاهده است. به علاوه - فقط فلورسانس به وضوح قابل مشاهده است. پلاس پلاس - قابل مشاهده با فلورسانس روشن. "به علاوه به علاوه" - فلورسانس قابل مشاهده و خیره کننده.
