الزامات آماده سازی نمونه های معمول برای میکروسکوپ

الزامات آماده سازی نمونه های معمول برای میکروسکوپ

میکروسکوپ کانفوکال یک محصول جدید با فناوری پیشرفته عصری است که در دهه 1980 توسعه یافت و امروزه یکی از ابزارهای تحلیلی مهم در زیست شناسی مولکولی و علوم زیستی است. میکروسکوپ کانفوکال بر اساس تصویربرداری میکروسکوپ فلورسانس با یک دستگاه اسکن لیزری اضافه شده است، با استفاده از یک کامپیوتر برای پردازش تصویر برای به دست آوردن تصاویر فلورسنت از ریزساختار داخل سلول ها یا بافت ها، و مشاهده تغییرات در مورفولوژی بسیاری از ماشین های سیگنال فیزیولوژیکی در سطح زیر سلولی. تبدیل شدن به یک ابزار تحقیقاتی قدرتمند در زمینه های مورفولوژی، زیست شناسی سلولی مولکولی، علوم اعصاب، فارماکولوژی، ژنتیک و سایر زمینه های علمی.

آماده سازی نمونه برای میکروسکوپ کانفوکال یک مرحله حیاتی قبل از تشخیص است. نمونه ها باید با پروب های فلورسنت (تک، دوتایی، سه گانه) برچسب گذاری شوند.

را
نمونه ها می توانند بافت های ثابت یا زنده یا کشت های ثابت یا زنده باشند. سلول ها باید روی ظروف کشت کوچک مخصوص Confocal یا ورقه های پوششی کشت شوند. سلول ها را به حالت تعلیق درآورید، تکان دهید یا برش ها را رها کنید و با لایه های پوششی پوشش دهید. ضخامت Zda نمونه حدود 1 ~ 2 میلی متر است، ضخامت شیشه پوشش استفاده شده باید کمتر از 0.17 میلی متر باشد، و ضخامت شیشه اسلاید باید بین 0.8~1.2 باشد. میلی متر، و سطح صاف است، ضخامت یکنواخت است، و فلورسانس تداخل آشکاری وجود ندارد. معمولاً از محیط نصب برای نمونه های ثابت استفاده می شود و گلیسرول تهیه شده در PBS با pH 8 معمولاً برای نصب استفاده می شود.

الزامات آماده سازی نمونه معمولی:

1. انتخاب رنگ

از آنجایی که میکروسکوپ کانفوکال از لیزر تک طول موج به عنوان منبع نور استفاده می کند، انتخاب رنگ های فلورسنت باید بر اساس طول موج لیزر مجهز به میکروسکوپ کانفوکال باشد. اگر چندین رنگ فلورسنت در یک نمونه وجود داشته باشد، طول موج انتشار آنها نیز باید تا حد امکان در نظر گرفته شود. برای جلوگیری از مشکلات متقاطع رنگ، روی هم قرار نگیرید.

2. انتخاب حامل نمونه

به طور کلی، لنز شیئی پرقدرت میکروسکوپ کانفوکال، عدسی روغنی است، دیافراگم عددی آن کوچک است و فاصله کاری بین لنز و نمونه لازم است که بیش از 0.17 میلی متر نباشد. اسلایدها و روکش ها خوب هستند. اگر سلول‌های معلق یا ذرات معلق باشد، می‌توان از یک پتری دیش اختصاص داده شده به میکروسکوپ کانفوکال برای حمل نمونه برای مشاهده استفاده کرد.

3. انتخاب محیط نصب

اگر نمونه فقط باید یک بار مشاهده شود و فلورسانس به راحتی خاموش نمی شود، می توانید غلظت معینی از مخلوط گلیسرول را برای مهر و موم کردن لام انتخاب کنید. اگر نمونه باید برای مدتی قرار داده شود و چندین بار گرفته شود، باید یک محیط نصب ضد فلورسانس انتخاب شود تا از دست دادن سیگنال های فلورسنت کاهش یابد.