استفاده صحیح از میکروسکوپ فلورسانس معکوس
میکروسکوپ فلورسانس معکوس یک میکروسکوپ چند منظوره است که در زمینه تحقیقات علوم زیستی پیشرفته استفاده می شود. ساختار آن پیچیده و گران است. بنابراین، برای اینکه دانشجویان تحصیلات تکمیلی پزشکی به درستی عملکرد و استفاده از میکروسکوپ فلورسانس معکوس را درک کنند، معلمان باید ابتدا عملکرد واقعی میکروسکوپ فلورسانس معکوس را نشان دهند. پیش از این، دورهای برای یادگیری دانش پایه میکروسکوپهای فلورسانس معکوس، معرفی ساختار، اصل، عملکرد و روشهای استفاده اولیه میکروسکوپهای فلورسانس معکوس، و سپس در عملیات خاص، برای نمونههای مختلف، نشان دادن عملکردهای مختلف، از کم عمق، راهاندازی شد. به عمق، به تدریج استاندارد کردن استفاده از میکروسکوپ های فلورسانس معکوس توسط دانشجویان فارغ التحصیل پزشکی.
1. استفاده صحیح از مشاهده میدان روشن. یکی از عملکردهای میکروسکوپ فلورسانس معکوس، مشاهده میدان روشن است. اصل اساسی این است که پس از تابش نور به نمونه، جذب نور هر قسمت برای تحقق تصویربرداری در پسزمینه روشن متفاوت است. این عمدتا برای سلول های رنگی یا رنگی، مشاهده نمونه هایی مانند برش های بافتی مناسب است.
2. استفاده صحیح از مشاهده کنتراست فاز. دومین عملکرد میکروسکوپ فلورسانس معکوس، مشاهده کنتراست فاز است. اصل اساسی آن تبدیل اختلاف مسیر نوری قسمت های مختلف نمونه به اختلاف دامنه است. مشاهده از طریق یک لنز عینی کنتراست فاز با یک صفحه فاز و یک لنز کندانسور با یک دیافراگم حلقوی محقق می شود. برای مشاهده سلولهای زنده یا بخشهای بافت رنگنشده، در فرآیند آموزش تجربی، علاوه بر هدایت صحیح دانشجویان فارغالتحصیل پزشکی برای رعایت روشهای عملیاتی اصلی مشاهده کنتراست فاز، راهنمایی آنها از اهمیت بیشتری برخوردار است. نمونه های مورد استفاده برای مشاهده کنتراست فاز را درک کرده و تسلط داشته باشند. برای آنها، مشاهده میکروسکوپی سلول های کشت شده رایج ترین مورد استفاده در تحقیقات علمی آینده است. اول از همه، برای انتخاب تجهیزات سلولی، به طور کلی استفاده از ظروف کشت شیشه ای و پلاستیکی، صفحات کشت و بطری های کشت توصیه می شود. بیشتر آنها بی رنگ و شفاف هستند و می توان آنها را مستقیماً روی یک میکروسکوپ فلورسنت معکوس بدون ریختن مایع سلولی و سایر روش ها مشاهده کرد. ثانیاً در هنگام مشاهده میکروسکوپی، پوشش تجهیزات را به دلخواه باز نکنید تا سلول ها آلوده نشوند. در نهایت، برای اپراتورها، آنها باید از دستکش، ماسک و کت سفید استفاده کنند که نه تنها می تواند از سلامت آنها محافظت کند، بلکه از آلودگی سلولی نیز جلوگیری می کند.
3. استفاده صحیح از مشاهدات فلورسانس. سومین عملکرد میکروسکوپ فلورسانس معکوس، مشاهده فلورسانس است. اصل اساسی استفاده از نور تحریک برای تحریک نمونه برای تولید فلورسانس است تا مشاهده شکل و موقعیت نمونه را متوجه شود. این عمدتا برای مشاهده نمونه های برچسب دار فلورسنت مناسب است. مشاهده فلورسانس عملکرد مهم یک میکروسکوپ فلورسانس معکوس است و لوازم جانبی آن گران قیمت و برای استفاده خاص است. برای اینکه دانشجویان فارغ التحصیل پزشکی به درستی عملکرد و استفاده از مشاهدات فلورسانس را درک کنند، معلمان نه تنها باید روش های اصلی عمل را به آنها بیاموزند، بلکه مهمتر از آن باید به آنها یاد دهند که بر ویژگی های آن مسلط شوند. اول از همه در تهیه نمونه ها، شیشه کشویی و کاور شیشه باید سطح صاف و ضخامت مناسب داشته باشد (شیشه کشویی بین 0.8 میلی متر تا 1.2 میلی متر و شیشه روکش حدود 0 باشد. {5}}.17mm)؛ نمونه باید ضخامت مناسبی داشته باشد و از همپوشانی یا پوشاندن سلول ها توسط ناخالصی ها جلوگیری کند. محیط نصب باید از یک مخلوط حجم مساوی از گلیسرول و بافر کربنات استفاده کند (0.5mol/L pH9.{10}}.5). ثانیاً، قبل از مشاهده فلورسنت، نور الکتریکی اتاق و نور سفید میکروسکوپ فلورسنت معکوس باید خاموش شود تا از محیط در یک اتاق تاریک اطمینان حاصل شود. در نهایت، در مشاهده فلورسانس، زمان مشاهده باید به شدت کنترل شود، به طور کلی 1-2 ساعت/زمان مناسب است، در غیر این صورت فلورسانس ضعیف شده و ناپدید می شود. هنگام تنظیم منبع نور، از عینک محافظ استفاده کنید تا از آسیب اشعه ماوراء بنفش به عینک جلوگیری شود.
4. استفاده صحیح از تصویربرداری. در تحقیقات علمی، نه تنها لازم است که میکروسکوپ فلورسانس معکوس بتواند مشاهدات مختلف را انجام دهد، بلکه همچنین مستلزم آن است که میکروسکوپ فلورسانس معکوس بتواند ضبط تصویر را درک کند. سیستم میکروسکوپ فلورسانس معکوس یک میکروسکوپ نوری را با یک کامپیوتر از طریق تبدیل فوتوالکتریک ترکیب می کند، نه تنها برای مشاهده میکروسکوپی روی چشمی، بلکه برای مشاهده پویای تصویر در زمان واقعی، ویرایش و ذخیره بر روی رایانه.
