PH متر - تعیین و تنظیم pH متوسط
همه میکروارگانیسم ها تحت تاثیر PH محیطی که در آن زندگی می کنند قرار می گیرند. اغلب، حضور گونه های انتخابی، محدوده PH را که در آن رشد می کنند، محدود می کند. گاهی اوقات، اسیدیته یا قلیایی بودن محیط نیز می تواند به عنوان یک عامل انتخاب رشد عمل کند. با این حال، برای محیطهای آزمایش بیوشیمیایی، محدوده PH که در آن میکروارگانیسمها فعالیت tk را در بستر نشان میدهند، باریکتر از محدوده pH مورد نیاز برای رشد است: بنابراین، تنظیم pH محیط در محدوده مورد انتظار مهم است. زمانی که آزمایشگاه محیط را با توجه به ترکیب محیط آماده می کند، pH باید بررسی و تنظیم شود. لازم به ذکر است که حتی برای محیط خشک مصنوعی آماده تهیه شده توسط کارخانه سازنده (به ویژه برای برخی از محیط های آبگیری شده استوک)، PH نهایی پس از ساخت محیط آزمایشی نیاز به اندازه گیری دارد.
دقیق ترین روش برای اندازه گیری PH یک محیط، PH متر است. قبل از استفاده، باید با یک محلول بافر استاندارد با pH شناخته شده (معمولا PH 4 تا 7) کالیبره شود. الکترود PH متر را با آب مقطر شستشو داده و در محیط کشت داخل بشر فرو کنید و سپس PH محیط کشت را از روی مقیاس pH متر بخوانید. هر سازنده دستورالعمل های عملیاتی دقیق برای هر نوع pH متر ارائه می دهد.
هنگام تهیه محیط کشت، PH را می توان به راحتی با استفاده از PH متر با هم زدن مکانیکی تنظیم کرد. محیط کشت باید در ظرفی (مانند یک لیوان بزرگ) آماده شود که بتوان آن را به طور مداوم هم زد. یا آهنرباهای بسته بندی شده با تفلون. PH محیط حاوی آگار پس از ذوب نیاز به تنظیم دارد که به راحتی با یک همزن مغناطیسی قابل گرم شدن انجام می شود. هنگام تنظیم pH، ابتدا از یک محلول بافر استاندارد با pH شناخته شده برای کالیبره کردن pH متر استفاده کنید. سپس الکترود مرکب و دماسنج مقاومتی (در صورت وجود) را در محیط قرار دهید، به آرامی مقدار مناسب اسید کلریدریک و هیدروکسید سدیم را از انتهای لیوان دور از الکترود اضافه کنید تا محیط به pH مورد نیاز برسد و حفظ شود.
جبران دمای pH متر باید تأثیر دما را بر روی سیستم الکترود در نظر بگیرد: در برخی رقت ها و محیط ها، pH به طور قابل توجهی با دما تغییر می کند. برای محیط های مایع و رقت ها، pH را معمولاً می توان در 25 درجه یا در دمایی که در آن استفاده می شود تنظیم و اندازه گیری کرد.
PH محیط آگار پس از حل شدن باید تنظیم شود و دمای انحلال بالای 45 درجه باشد: بنابراین pH محیط جامد باید در دمای استفاده تعیین شود. در این زمان باید از یک الکترود کامپوزیت سر تخت استفاده شود و جبران دمای pH متر باید به صورت دستی کالیبره شود. هنگام تهیه محیط کشت، اگر مشخص شود که PH محیط کشت بین حالت ذوب و انجماد متفاوت است، به این معنی است که در تنظیم PH خطایی وجود دارد.
به همین ترتیب، هنگامی که محیط آماده شده با حرارت استریل می شود (به عنوان مثال، اتوکلاو)، ممکن است تغییرات pH را نیز تجربه کند. برای محیط کم آب، سازنده این موضوع را در نظر گرفته است و معمولاً نیازی به تنظیم pH نیست، اما pH محیط مورد استفاده باید به دقت بررسی شود. اگر PH محیط آگار دهیدراته باید در حین انحلال مجدد یا آماده سازی تنظیم شود، بهتر است پس از مرحله استریل کردن، آن را با اسید هیدروکلریک استریل شده با فیلتر و محلول هیدروکسید سدیم تنظیم کنید تا از گرم شدن بیش از حد محیط جلوگیری شود. هنگام تهیه محیط با مواد اولیه یا دارویی مختلف، PH محیط پس از اتوکلاو باید بررسی شود. علاوه بر این، اگر مشخص شد که pH محیط پس از هر اتوکلاو یکسان تغییر می کند، می توان PH را هنگام تهیه محیط به طور مناسب تنظیم کرد. با این حال باز هم تعیین PH نهایی محیط پس از استریلیزاسیون ضروری است.
