مزایای بهبود یافته میکروسکوپ مولتی فوتونی اسکن لیزری

مزایای بهبود یافته میکروسکوپ مولتی فوتونی اسکن لیزری

میکروسکوپ مولتی فوتونی اسکن لیزری یک پیشرفت عمده در میکروسکوپ نوری است که عمدتاً برای مشاهده ساختار عمیق سلول‌های زنده، سلول‌ها و بافت‌های ثابت است و می‌تواند ساختارهای صفحه Z چندلایه شفاف و واضح، یعنی برش‌های نوری را به دست آورد و بتواند بسازد. ساختار جامد سه بعدی نمونه. میکروسکوپ کانفوکال از یک منبع نور لیزری استفاده می کند که برای پر کردن کل صفحه کانونی پشتی عدسی شیئی منبسط می شود و سپس از طریق سیستم عدسی عدسی شیئی به نقطه بسیار کوچکی در صفحه کانونی نمونه همگرا می شود. بسته به دیافراگم عددی عدسی شیئی، قطر درخشان ترین نقطه روشنایی حدود 0}.25 ~ 0.8 میکرومتر و عمق آن حدود 0.5 ~ 1.5 است. میکرومتر اندازه نقطه کانونی به طراحی میکروسکوپ، طول موج لیزر، ویژگی‌های عدسی شیئی، تنظیم حالت واحد اسکن و ماهیت نمونه بستگی دارد. میکروسکوپ های میدانی دارای طیف وسیعی از روشنایی و عمق روشنایی زیادی هستند، در حالی که میکروسکوپ های کانفوکال دارای روشنایی هستند که در یک نقطه کانونی در صفحه کانونی متمرکز شده است. اساسی‌ترین مزیت میکروسکوپ کانفوکال این است که می‌تواند برش نوری دقیق نمونه‌های فلورسنت ضخیم (حداکثر 5{12}} میکرومتر یا بیشتر) را با ضخامت حدود 0.5 تا 1.5 میکرومتر انجام دهد. یک سری تصاویر بخش نوری را می توان با حرکت دادن نمونه به بالا و پایین با موتور پله ای محور Z میکروسکوپ به دست آورد. اکتساب اطلاعات تصویر در داخل صفحه کنترل می شود و سیگنال های سایر نقاط روی نمونه با آن تداخل پیدا نمی کنند. پس از حذف اثر فلورسانس پس‌زمینه و افزایش نسبت سیگنال به نویز، کنتراست و وضوح تصاویر هم کانونی در مقایسه با تصاویر فلورسانس سنتی روشنایی میدان به طور قابل‌توجهی بهبود می‌یابد. در بسیاری از نمونه‌ها، بسیاری از اجزای ساختاری پیچیده برای تشکیل سیستم‌های پیچیده در هم تنیده شده‌اند، اما زمانی که بتوان بخش‌های نوری کافی را جمع‌آوری کرد، می‌توانیم آنها را به‌صورت سه بعدی از طریق نرم‌افزار بازسازی کنیم. این رویکرد تجربی به طور گسترده در تحقیقات بیولوژیکی برای روشن کردن روابط پیچیده ساختاری و عملکردی بین سلول‌ها یا بافت‌ها استفاده شده است.