نحوه انتخاب میکروسکوپ فلورسانس مناسب
میکروسکوپ فلورسانس یک تجهیزات تصویربرداری میکروسکوپی استاندارد در آزمایشگاه ها و بخش های پاتولوژی است که از ویژگی های فلورسانس برای مشاهده و تصویربرداری استفاده می کند. این به طور گسترده ای در زمینه های مختلف مانند زیست شناسی سلولی، نوروبیولوژی، گیاه شناسی، میکروبیولوژی، آسیب شناسی، ژنتیک و غیره استفاده می شود. تصویربرداری فلورسانس دارای مزایای حساسیت و ویژگی بالا است که آن را برای مشاهده توزیع پروتئین های خاص، اندامک ها و غیره بسیار مناسب می کند. در بافت ها و سلول ها، مطالعه محلی سازی و برهمکنش های مشترک، ردیابی فرآیندهای دینامیکی زندگی مانند تغییرات غلظت یون و غیره.
انتخاب میکروسکوپ
میکروسکوپهای فلورسانس عمدتاً به سه دسته تقسیم میشوند: میکروسکوپهای فلورسانس قائم (مناسب برای برش)، میکروسکوپهای فلورسانس معکوس (مناسب برای سلولهای زنده و همچنین برای برش) و میکروسکوپهای فلورسانس استریو (مناسب برای نمونههای بزرگتر، ماهیهای گورخر، مانند گیاهان/ماهیهای بزرگتر) جنینی)، مداکا، اندام های موش/موش و غیره).
انتخاب بلوک های فیلتر فلورسنت
انتخاب بلوکهای فیلتر نه تنها باید طول موجهای تحریک و انتشار پروبهای فلورسنت را در نظر بگیرد، بلکه باید در نظر بگیرد که آیا تحریک غیر اختصاصی وجود دارد و آیا تداخل رنگی برای نمونههای برچسبدار چند رنگ وجود دارد یا خیر. در آزمایش، نزدیکترین طول موج به پیک تحریک را تا حد امکان برای تحریک انتخاب خواهیم کرد و محدوده دریافت باید شامل انتشار پیک باشد. پیک تحریک الکسا فلور 488 500 نانومتر است و فیلتر تحریک 480/40 را می توان در میکروسکوپ فلورسانس انتخاب کرد. بلوک های فیلتر فلورسنت رایج در میکروسکوپ فلورسانس را می توان به دو نوع تقسیم کرد: گذر طولانی (LP) و گذر باند (BP) که همچنین باید بر اساس نیاز انتخاب شوند.
میکروسکوپ کانفوکال
در مشاهدات میکروسکوپ فلورسانس سنتی، به دلیل همپوشانی مواد نشاندار فلورسنت و ساختارهای فلورسانس خود به خود، آنها به طور محکم به یکدیگر متصل می شوند. با این حال، اهداف میکروسکوپ فلورسانس در حال سقوط سنتی نه تنها نور را از صفحه کانونی جمع آوری می کنند، بلکه نور را به سمت بالا و پایین صفحه کانونی پراکنده می کنند که منجر به کاهش قابل توجه وضوح تصویر و کنتراست می شود.
تصویربرداری کانفوکال فقط نور منعکس شده از صفحه خود فوکوس را تشخیص می دهد، بنابراین مشکل فوق حل می شود. منبع نور از طریق سوراخی یک نقطه کوچک و ظریف در صفحه کانونی ایجاد می کند و نور ساطع شده از صفحه کانونی از طریق عدسی شیئی جمع آوری می شود. اکثر فلورسانس ساطع شده از نقاط بالا یا پایین صفحه کانونی عدسی شیئی نمی تواند به سوراخ سوزنی همگرا شود. فقط فلورسانس واقع در صفحه کانونی و بخش کوچکی از فلورسانس غیر متمرکز می تواند از سوراخ سوزن عبور کند، در حالی که پرتو نور خارج از صفحه کانونی در جلو یا پشت صفحه سوراخ سوزنی همگرا می شود و از ورود به آشکارساز از طریق سوراخ سوراخ مسدود می شود. تصویر شناسایی شده از سطح کانونی است، بنابراین کیفیت تصویر نهایی تا حد زیادی بهبود می یابد.
با توجه به مزایا و کاربردهای مختلف میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری، در حال حاضر یک دستیار آزمایشی ضروری در زمینههای زیستشناسی سلولی، گیاهشناسی و تحقیقات سلولی با دقت بالا است. ضمناً در مراکز علمی تحقیقاتی آینده، اساسی ترین و اصلی ترین ابزار پژوهشی خواهد بود.
