چگونه بین میکروسکوپ معکوس و میکروسکوپ فلورسانس انتخاب کنیم؟
میکروسکوپ ابزار مهمی در کشت سلولی و آزمایشات مشتقات مرتبط است. در حال حاضر انواع مختلفی از میکروسکوپ ها در بازار وجود دارد و انتخاب میکروسکوپی که نیازها را برآورده کند و مناسب باشد یک چالش است. در زیر اصول میکروسکوپ معکوس و میکروسکوپ فلورسانس را برای انتخاب همه معرفی می کنیم.
میکروسکوپ معکوس مانند یک میکروسکوپ معمولی عمدتاً از سه بخش تشکیل شده است: بخش مکانیکی، بخش نورپردازی و بخش نوری. ترکیب یک میکروسکوپ معکوس مانند میکروسکوپ عمودی معمولی است، با این تفاوت که عدسی شیئی و سیستم روشنایی معکوس هستند، اولی در زیر صحنه و دومی بالای صحنه. این ساختار به طور قابل توجهی فاصله موثر بین سیستم نورافکن روشنایی و صحنه را افزایش میدهد و قرار دادن ابزارهای مشاهده ضخیمتر مانند ظروف کشت و بطریهای کشت سلولی را آسانتر میکند (البته میتوان از اسلایدهای شیشهای نیز استفاده کرد)، در حالی که فاصله کاری بین عدسی شیئی و مواد لازم نیست خیلی بزرگ باشد. میکروسکوپ معکوس توسط موسسات پزشکی و بهداشتی، دانشگاه ها و موسسات تحقیقاتی برای مشاهده میکروارگانیسم ها، سلول ها، باکتری ها، کشت بافت ها، سوسپانسیون ها، رسوبات و ... استفاده می شود و می تواند به طور مداوم روند تکثیر و تقسیم سلولی و باکتریایی را در محیط کشت مشاهده کند. می تواند هر شکلی از این فرآیند را ثبت کند. به طور گسترده در زمینه هایی مانند سیتولوژی، انگل شناسی، انکولوژی، ایمونولوژی، مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی صنعتی و گیاه شناسی استفاده می شود.
میکروسکوپ فلورسانس برای مطالعه جذب، انتقال، توزیع و محلی سازی مواد در سلول ها استفاده می شود. برای شی مورد آزمایش، دو راه برای تولید فلورسانس وجود دارد: فلورسانس خود به خود، که مستقیماً توسط تابش فرابنفش ساطع می شود. فلورسانس ثانویه زمانی اتفاق می افتد که جسم مشاهده شده با رنگ های فلورسنت درمان می شود و قبل از انتشار فلورسانس در معرض نور ماوراء بنفش قرار می گیرد. برخی از مواد موجود در سلول ها، مانند کلروفیل، پس از قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش، فلورسانس خود به خود تولید می کنند. برخی از مواد ممکن است خود فلورسانس ساطع نکنند، اما اگر با رنگ های فلورسنت یا آنتی بادی های فلورسنت رنگ آمیزی شوند، می توانند فلورسانس ثانویه را تحت اشعه ماوراء بنفش نیز منتشر کنند. یک میکروسکوپ فلورسانس از یک منبع نور نقطهای با کارایی بالا برای ساطع طول موج مشخصی از نور (UV 365nm یا UV آبی 420nm) از طریق یک سیستم فیلتر رنگی به عنوان نور تحریک استفاده میکند، که مواد فلورسنت موجود در نمونه را تحریک میکند تا رنگهای مختلف فلورسانس ساطع شود. پس از آن، از طریق بزرگنمایی عدسی شیئی و چشمی مشاهده می شود. به این ترتیب، حتی با فلورسانس ضعیف، به راحتی قابل تشخیص است و در پس زمینه های متضاد قوی بسیار حساس است. این عمدتا برای مطالعه ساختار سلولی، عملکرد و ترکیب شیمیایی استفاده می شود.
میکروسکوپ فلورسانس را می توان به دو نوع تقسیم کرد: نوع انتقال و نوع سقوط. اولی ابتدایی تر است، در حالی که دومی پیشرفته تر است. ساختار اصلی دو نوع میکروسکوپ فلورسانس مشابه است، با تفاوت اصلی این است که نور تحریک عبوری از نمونه عبور می کند و به طور کلی فلورسانس تولید می کند. سپس فلورسانس وارد عدسی شیئی می شود و هر چه بزرگنمایی بیشتر باشد، فلورسانس ضعیف تر است. نور تحریک در حال سقوط بر روی سطح نمونه پخش می شود و فلورسانس تولید می کند که وارد عدسی شیئی می شود. هر چه بزرگنمایی بیشتر باشد، فلورسانس قوی تر است و برای رصد با قدرت بالا مناسب است. اجزای اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس شامل یک منبع نور لامپ جیوه، یک صفحه فیلتر تحریک، یک اسپکتروفتومتر (نوع قطره)، یک صفحه فیلتر سرکوب کننده و یک کندانسور میدان تاریک (نوع انتقال) است. علاوه بر این، به دلیل گرم شدن شدید لامپ های جیوه ای، اکثر آنها مجهز به فیلترهای جاذب حرارت نیز هستند. برخی از میکروسکوپ های فلورسانس نیز دارای یک هدف کنتراست فاز و یک دیافراگم دایره ای هستند که امکان مشاهده کنتراست فاز را فراهم می کند. برخی از میکروسکوپ های فلورسانس ساختار معکوس را اتخاذ می کنند که آن نیز یک میکروسکوپ معکوس است و غیره.
علاوه بر این، میکروسکوپ های فوق را می توان با نصب CCD در میکروسکوپ های دیجیتال مونتاژ کرد که تصاویر فیزیکی مشاهده شده توسط میکروسکوپ را به تصاویر آنالوگ دیجیتال تبدیل می کند و آنها را در رایانه تصویر می کند. در نتیجه، میتوانیم تحقیقات خود را در زمینه میکرو از مشاهدههای دوچشمی سنتی به تولید مثل از طریق نمایشگرها تغییر دهیم و در نتیجه کارایی کار را بهبود دهیم.
