چگونه بین میکروسکوپ معکوس و میکروسکوپ فلورسانس انتخاب کنیم؟
در کشت سلولی و آزمایشات مشتقات مرتبط، میکروسکوپ ابزار بسیار مهمی است. در حال حاضر انواع مختلفی از میکروسکوپ ها در بازار وجود دارد. انتخاب میکروسکوپی که نیازها را برآورده کند و قابل اجرا باشد، چالش برانگیز است. در ادامه به معرفی اصول میکروسکوپ معکوس و میکروسکوپ فلورسانس می پردازیم تا بتوانید به راحتی انتخاب کنید.
ترکیب میکروسکوپ معکوس مانند میکروسکوپ معمولی است که عمدتاً شامل سه قسمت است: بخش مکانیکی، بخش روشنایی و بخش نوری. ترکیب میکروسکوپ معکوس مانند میکروسکوپ عمودی معمولی است، با این تفاوت که عدسی شیئی و سیستم روشنایی معکوس هستند، اولی زیر صحنه و دومی بالای صحنه است. چنین ساختاری می تواند به طور قابل توجهی فاصله موثر بین سیستم متمرکز کننده روشنایی و صحنه را افزایش دهد که برای قرار دادن اجسام ضخیم تر قابل مشاهده مانند ظروف کشت و بطری های کشت سلولی راحت است (البته اسلایدهای شیشه ای و غیره نیز موجود است). و در عین حال فاصله بین عدسی شیئی و ماده لازم نیست فاصله کاری بین آنها خیلی زیاد باشد. میکروسکوپ معکوس برای مشاهده میکروارگانیسم ها، سلول ها، باکتری ها، کشت بافت، سوسپانسیون ها، رسوبات و غیره در واحدهای پزشکی و بهداشتی، موسسات آموزش عالی و موسسات تحقیقاتی استفاده می شود. می تواند به طور مداوم روند تولید مثل و تقسیم سلول ها، باکتری ها و غیره را در محیط کشت مشاهده کند و می تواند از هر شکلی در این فرآیند عکس بگیرد. این به طور گسترده ای در سیتولوژی، انگل شناسی، سرطان شناسی، ایمونولوژی، مهندسی ژنتیک، میکروبیولوژی صنعتی، گیاه شناسی و سایر زمینه ها استفاده می شود.
میکروسکوپ فلورسانس برای مطالعه جذب و حمل و نقل مواد در سلول ها، توزیع و محلی سازی مواد شیمیایی و غیره استفاده می شود. برای جسم تحت بازرسی دو راه برای تولید فلورسانس وجود دارد: اتوفلورسانس که پس از تابش اشعه ماوراء بنفش مستقیماً فلورسانس ساطع می کند. سبک؛ برخی از مواد موجود در سلول ها، مانند کلروفیل، پس از تابش اشعه ماوراء بنفش، اتوفلورسانس تولید می کنند. اگرچه برخی از مواد خود نمی توانند فلورسانس کنند، اما می توانند پس از رنگ آمیزی با رنگ های فلورسنت یا آنتی بادی های فلورسنت پس از تابش اشعه ماوراء بنفش، فلورسانس ثانویه را منتشر کنند. میکروسکوپ فلورسانس از یک منبع نور نقطه ای با راندمان نوری بالا استفاده می کند تا نوری با طول موج معین (نور فرابنفش 365 نانومتر یا نور آبی بنفش 420 نانومتر) را از طریق سیستم فیلتر به عنوان نور تحریک ساطع کند و پس از برانگیختن مواد فلورسنت موجود در نمونه، فلورسنس مختلف ساطع کند. رنگ ها، سپس مشاهده از طریق بزرگنمایی عدسی شیئی و چشمی انجام می شود. به این ترتیب، تحت یک پسزمینه کنتراست قوی، حتی اگر فلورسانس بسیار ضعیف باشد، به راحتی قابل تشخیص است و از حساسیت بالایی برخوردار است. این عمدتا برای تحقیقات ساختار سلولی و عملکرد و ترکیب شیمیایی استفاده می شود.
میکروسکوپ های فلورسانس به دو نوع انتقال و نوع اپی جهش تقسیم می شوند که اولی ابتدایی تر و دومی پیشرفته تر است. ساختار اصلی دو نوع میکروسکوپ فلورسانس مشابه است، تفاوت اصلی این است: نور تحریک نوع انتقال از نمونه عبور می کند و کل نمونه فلورسانس تولید می کند که سپس وارد عدسی شیئی می شود. هر چه بزرگنمایی بیشتر باشد، فلورسانس ضعیف تر است. نور تحریکی از نوع epi-emission بر روی سطح نمونه تابیده می شود، سطح نمونه فلورسانس تولید می کند و فلورسانس دوباره وارد عدسی شیئی می شود. هرچه بزرگنمایی بیشتر باشد، فلورسانس قوی تر است که برای مشاهده با بزرگنمایی بالا مناسب است. اجزای اصلی میکروسکوپ فلورسانس شامل منبع نور لامپ جیوه ای، صفحه فیلتر تحریک، آینه دو رنگ (نوع قسمت)، صفحه فیلتر فشرده و کندانسور میدان تاریک (نوع انتقال) و غیره می باشد. تولید گرمای شدید لامپهای جیوهای که اکثر آنها مجهز به فیلترهای جاذب حرارت هستند. برخی از میکروسکوپ های فلورسانس نیز دارای اهداف کنتراست فاز و دیافراگم های حلقوی هستند، بنابراین مشاهدات کنتراست فاز ممکن است. همچنین میکروسکوپ های فلورسنتی وجود دارند که ساختار معکوس را اتخاذ می کنند، میکروسکوپ معکوس دیگری و غیره.
علاوه بر این، میکروسکوپ های فوق را می توان با نصب یک CCD در یک میکروسکوپ دیجیتالی مونتاژ کرد که تصویر فیزیکی مشاهده شده توسط میکروسکوپ را از طریق تبدیل دیجیتال به آنالوگ به تصویر روی رایانه تبدیل می کند. بنابراین، میتوانیم تحقیق در زمینه میکروسکوپی را از مشاهده دوچشمی معمولی به بازتولید روی نمایشگر تغییر دهیم و در نتیجه کارایی کار را بهبود دهیم.
