در مورد میکروسکوپ فلورسانس چقدر می دانید؟
میکروسکوپ های فلورسانس معمولاً از لامپ های جیوه ای با شدت بالا به عنوان منبع نور تحریک استفاده می کنند. فیلترها برای فیلتر کردن نور ناخواسته استفاده میشوند و تنها نور خالص و با شدت بالا باقی میمانند که فلوروفور را تحریک میکند. پس از تابش نور تک رنگ به نمونه از طریق عدسی شیئی، نمونه برای انتشار نور (فلورسانس) برانگیخته می شود و نور فلورسانس و تحریک هر دو در طول مسیر نوری عدسی شیئی برمی گردند. در این حالت یک آینه دو رنگ برای فیلتر کردن نور تحریک لازم است. ، اجازه می دهیم فقط فلورسانس را ببینیم.
این فلورسانس در طول مسیر نور میکروسکوپ به چشمی می رسد و سپس وارد چشم ما می شود و در آنجا می توانیم فلورسانس ساطع شده توسط فلوروفور را ببینیم.
پیش بررسی و تنظیم میکروسکوپ فلورسانس:
(1) قبل از هر مشاهده فلورسانس، لازم است به طور معمول تراز رشته، فوکوس مسیر نوری، دیافراگم دیافراگم و تنظیمات دیافراگم میدانی دستگاه فلورسانس را بررسی کنید.
(2) آیا مجموعه فیلتر تحریک/گسیل فلورسانس مورد نیاز در مبدل نصب شده است، آیا لنز شیئی میکروسکوپ فلورسانس به درستی پیکربندی شده است یا خیر، و لکه های روغن و گرد و غبار روی لنز جلویی لنز شیئی را حذف کنید.
(3) اگر مشاهده کنتراست فاز نور عبوری به طور همزمان انجام شود، لازم است ترکیب مرکز کندانسور و حلقه کنتراست فاز در مقابل عدسی شیئی بررسی شود.
(4) بررسی کنید که آیا حامل نمونه (شیشه اسلاید، شیشه روکش و سایر ظروف) با مایع یا گرد و غبار پوشانده شده است و آیا ضخامت آن در محدوده فاصله کاری کالیبره شده عدسی هدف قرار دارد یا خیر. نمونه برش داده شده نباید خیلی ضخیم باشد، ترجیحاً کمتر یا مساوی 10 میکرومتر باشد.
(5) از آنجایی که منبع نور حاوی پرتوهای فرابنفش است، یک صفحه محافظ نور قهوه ای در بالای جلوی صحنه قرار می گیرد تا از آسیب اشعه ماوراء بنفش به شبکیه جلوگیری شود.
(6) بی ثباتی ولتاژ طول عمر لامپ جیوه فشار بالا را کاهش می دهد و منبع تغذیه منبع نور مجهز به تثبیت کننده ولتاژ است.
(7) به منظور طولانی کردن عمر لامپ جیوه، می توان آن را 15 دقیقه پس از روشن شدن خاموش کرد. هنگامی که برق فلورسنت لامپ جیوه خاموش می شود، باید حداقل 10 دقیقه صبر کنید تا بخار جیوه دوباره راه اندازی شود تا خنک شود و به حالت اولیه برگردد، در غیر این صورت عمر لامپ تحت تأثیر قرار می گیرد.
مشاهده تصویر با میکروسکوپ فلورسانس:
(1) حدود 5-10 دقیقه پس از روشن کردن منبع نور فلورسنت، شدت نور تحریک تمایل به پایداری دارد و نمونه برای مشاهده بارگذاری میشود. به منظور جلوگیری از خاموش شدن فلورسانس نمونه ناشی از نور تحریک بیش از حد در طول فرآیند فوکوس و جستجوی اجسام، ابتدا میکروسکوپ فلورسانس را بزرگنمایی کنید نور تحریک را با شدت متوسط با دیافراگم دیافراگم تنظیم کنید یا یک فیلتر ND اضافه کنید. مرحله نمونه را به طور منظم حرکت دهید. پس از تأیید تصویر آینه ای، برای عکسبرداری و ضبط آن را به حالت فلورسنت تنظیم کنید.
(2) تنظیمات برای کیفیت تصویر ضعیف. علاوه بر عوامل آماده سازی نمونه، تنظیمات لازم را می توان انجام داد:
① دستگاه های محافظ نور یا محدود کننده نور را در مسیر نوری تصویربرداری، مانند لوازم جانبی DIC، فیلترهای ND و غیره حذف کنید.
② فوکوس گیرنده و اندازه دیافراگم دیافراگم میکروسکوپ فلورسانس را دوباره تنظیم کنید.
③ حلقه اصلاح اختلاف پوشش لنز شیئی میکروسکوپ فلورسانس را با دقت تنظیم کنید.
نکات کاربردی میکروسکوپ فلورسانس
میکروسکوپ فلورسانس از تصویربرداری "فلورسانس اکتینیک" استفاده می کند. اگر طول موج تحریک انتخاب شده در ناحیه نزدیک به فرابنفش (320-400nm) باشد که با چشم غیرمسلح نامرئی است، طیف نشر فلورسانس نیز کوتاهتر از طول موج متوسط منابع نور آینهای نور معمولی است. بهتر کردن. فوتون های پرانرژی با الکترون ها برخورد می کنند و باعث می شوند که الکترون ها از حالت پایه به حالت برانگیخته تبدیل شوند. الکترون ها در حالت برانگیخته بسیار ناپایدار هستند و به حالت پایه برمی گردند. در این فرآیند بخشی از انرژی حرارتی مصرف می شود و فوتون های جدید منتشر می شود. فوتون جدید انرژی کمتری نسبت به فوتون اصلی دارد و بنابراین طول موج بیشتری دارد. از آنجایی که طول موج فوتون جدید با طول موج فوتون نور فرودی متفاوت است، دو پرتو نور با طول موج های مختلف با یک روش پردازش نوری خاص از هم جدا می شوند، به طوری که ما فقط فوتون های جدید ساطع شده (سیگنال فلورسانس) را می بینیم. میکروسکوپ فلورسانس تصاویر فلورسانس را می بیند.
