مورفولوژی سلول های میکروبی چگونه در زیر میکروسکوپ مشاهده می شود؟

مورفولوژی سلول های میکروبی چگونه در زیر میکروسکوپ مشاهده می شود؟

میکروسکوپ ها برای دیدن اجسام خندان که با چشم غیر مسلح دیده نمی شوند اختراع شدند. میکروارگانیسم ها بسیار کوچک هستند، بنابراین باید آنها را بزرگ کرد و با کمک میکروسکوپ مشاهده کرد. علاوه بر این، انواع مختلفی از میکروارگانیسم ها وجود دارد، بنابراین اساساً اکثر میکروسکوپ های نوری می توانند میکروارگانیسم ها را مشاهده کنند. سوال بعدی این است که از چه نوع میکروسکوپی برای مشاهده و تجزیه و تحلیل چه نوع میکروارگانیسم هایی باید استفاده کرد. میکروسکوپ های معمولی که می توانند برای مشاهده مورفولوژی میکروبی استفاده شوند عبارتند از میکروسکوپ های بیولوژیکی، میکروسکوپ های کنتراست فاز، میکروسکوپ های معکوس، میکروسکوپ های فلورسانس، میکروسکوپ های کانفوکال و غیره.

در زیر میکروسکوپ‌های مختلفی که برای مشاهده میکروارگانیسم‌ها استفاده می‌شوند، توضیح داده شده است:

1. میکروسکوپ نوری معمولی از نور طبیعی یا نور به عنوان منبع نور استفاده می کند و طول موج آن حدود 0.4 میکرومتر است. وضوح میکروسکوپ نصف طول موج یعنی 0.2 میکرومتر است و کوچکترین تصویری که با چشم غیر مسلح قابل مشاهده است 0.2 میلی متر است. بنابراین، استفاده از یک آینه روغنی (غوطه‌وری) برای بزرگ‌نمایی 1000 برابری می‌تواند ذرات 0.2 میکرومتری را به 0.2 میلی‌متر قابل مشاهده با چشم غیر مسلح بزرگ کند. از میکروسکوپ های نوری معمولی می توان برای مشاهده باکتری ها، اکتینومیست ها و قارچ ها استفاده کرد.

2. میکروسکوپ تاریکی معمولاً برای مشاهده مورفولوژی و حرکت میکروبی رنگ نشده استفاده می شود. پس از نصب کندانسور میدان تاریک در میکروسکوپ معمولی، نور نمی تواند مستقیما از وسط نفوذ کند و میدان دید تاریک است. هنگامی که نمونه نور مایل را از لبه کندانسور دریافت می کند، می تواند پراکنده شود، بنابراین میکروارگانیسم های درخشان مانند باکتری ها یا اسپیروکت ها را می توان در پس زمینه میدان تاریک مشاهده کرد.

3. میکروسکوپ کنتراست فاز میکروسکوپ کنتراست فاز از اثر نور صفحه اختلاف فاز برای تغییر فاز نور و دامنه نور مستقیم استفاده می کند و اختلاف فاز نور را به اختلاف شدت نور تبدیل می کند. در یک میکروسکوپ کنتراست فاز، زمانی که نور از یک نمونه رنگ‌آمیزی عبور می‌کند، اختلاف فاز نور به دلیل ناهماهنگی چگالی قسمت‌های مختلف نمونه ایجاد می‌شود و مورفولوژی، ساختار داخلی و حالت حرکت میکروارگانیسم‌ها را می‌توان مشاهده کرد.

4. میکروسکوپ فلورسانس میکروسکوپ فلورسانس اساساً همان میکروسکوپ نوری معمولی است، تفاوت اصلی منبع نور، فیلتر و کندانسور است. در حال حاضر بیشتر آنها از دستگاه های اپی لایت استفاده می کنند و معمولاً از لامپ های جیوه ای پرفشار به عنوان منبع نور استفاده می شود که می توانند نور ماوراء بنفش یا آبی-بنفش را ساطع کنند. دو نوع فیلتر وجود دارد: فیلتر تحریک و فیلتر جذب. علاوه بر کندانسورهای میدان روشن عمومی، کندانسورهای میدان تاریک نیز می توانند در میکروسکوپ های فلورسانس با استفاده از نور آبی برای افزایش کنتراست بین فلورسانس و پس زمینه استفاده شوند. این روش برای تشخیص یا شناسایی باکتری های رنگ آمیزی شده با رنگدانه های فلورسنت یا ترکیب شده با آنتی بادی های فلورسنت قابل استفاده است.

5. میکروسکوپ های الکترونی از جریان الکترونی به عنوان منبع نور استفاده می کنند و طول موج آن ده ها هزار بار با نور مرئی متفاوت است که وضوح را تا حد زیادی بهبود می بخشد. همچنین از یک سیم پیچ مغناطیسی به عنوان یک سیستم تقویت نوری استفاده می کند و بزرگنمایی می تواند به ده ها هزار یا صدها هزار بار برسد. اغلب برای مشاهده ذرات ویروس و فراساختار باکتری استفاده می شود.

مشاهده نمونه های میکروبی رنگ نشده:
نمونه های رنگ آمیزی نشده را می توان به طور کلی برای مشاهده مورفولوژی، قدرت و حرکت باکتری استفاده کرد. باکتری ها در صورت عدم رنگ آمیزی بی رنگ و شفاف هستند و در زیر میکروسکوپ عمدتاً با تفاوت بین ضریب شکست باکتری و محیط اطراف مشاهده می شوند. باکتری های دارای تاژک به شدت حرکت می کنند، در حالی که باکتری های بدون تاژک حرکت براونی نامنظم نشان می دهند. باکتری های زنده مانند ترپونما پالیدوم، لپتوسپیرا و کمپیلوباکتر دارای اشکال و الگوهای حرکتی متمایز هستند که از اهمیت تشخیصی برخوردار هستند. روش های رایج استفاده شده عبارتند از روش افت فشار، روش افت آویز و روش مویرگی.

1. اطراف سوراخ مقعر شیشه مقعر تمیز را به روش قطره آویزان وازلین بمالید، با استفاده از حلقه تلقیح حلقه ای از سوسپانسیون باکتری را بگیرید و در مرکز شیشه پوشش قرار دهید، سپس سوراخ مقعر شیشه مقعر را با آن تراز کنید. قطره را در مرکز شیشه کاور قرار دهید و روی آن را بپوشانید، سپس سریع آن را برگردانید، شیشه پوشش را به آرامی فشار دهید تا محکم به وازلین لبه سوراخ مقعر بچسبد و زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی بالا مشاهده کنید (یا میدان تاریک).

2. یک حلقه از سوسپانسیون باکتریایی را با یک حلقه تلقیح بردارید و به روش افت فشار در مرکز یک لام شیشه ای تمیز قرار دهید و به آرامی سوسپانسیون باکتری را با یک لیوان پوششی بپوشانید و مراقب باشید که حباب و سرریز سوسپانسیون باکتری ایجاد نشود. . پس از چند ثانیه ایستادن، زیر میکروسکوپ پرقدرت در میدان روشن (یا میدان تاریک) مشاهده کنید.

3. روش مویرگی عمدتا برای بررسی سینتیک باکتری های بی هوازی استفاده می شود. معمولاً طول 6{3}}~70 میلی‌متر را انتخاب کنید. پس از سیفون کردن سوسپانسیون باکتری های بی هوازی از طریق یک مویرگ با دهانه 0.{4}}.0 میلی متر، دو سر مویرگ را با شعله ببندید. مویرگ روی اسلاید شیشه ای با کاغذ پلاستیکی ثابت شد و زیر یک لنز پرقدرت در میدان تاریک مشاهده شد.

مشاهده نمونه های میکروبی رنگ آمیزی شده با میکروسکوپ:
پس از رنگ آمیزی نمونه باکتری، به دلیل تضاد شدید رنگ بین باکتری و محیط اطراف، خصوصیات مورفولوژیکی باکتری (مانند اندازه، شکل، آرایش و غیره) باکتری و برخی ساختارهای خاص (مانند به عنوان کپسول، تاژک، هاگ، و غیره) را می توان به وضوح زیر یک میکروسکوپ نوری معمولی مشاهده کرد، و باکتری ها را می توان با توجه به واکنش رنگ آمیزی طبقه بندی و شناسایی کرد.

(1) روش کلی رنگ آمیزی باکتریایی روش کلی رنگ آمیزی باکتریایی عبارت است از: اسمیر (خشک کردن) - تثبیت - رنگ آمیزی.

1. آماده سازی اسمیر خون، ترشحات، دفعات، مایع سوراخ کننده و کشت مایع، و لام مستقیم فیلم نازک روی لام های شیشه ای. کالبد شکافی یا بافت های حیوانی آلوده، ضایعه را با یک سواب پنبه برای نمونه برداری آغشته کنید. برای تهیه کلنی های باکتریایی یا چمنزار روی محیط جامد، ابتدا از حلقه تلقیح استفاده کنید تا حلقه ای از نرمال سالین را بگیرید و در مرکز لام شیشه ای قرار دهید، سپس از حلقه تلقیح استریل برای برداشتن مقدار کمی از کشت و آسیاب استفاده کنید. آن را به طور یکنواخت در نرمال سالین، در یک سطح پوشش داده شده 1 سانتی متر مربع پخش کنید و بگذارید به طور طبیعی در دمای اتاق خشک شود یا به آرامی در فاصله خشک شود.

2. هدف از تثبیت کشتن باکتری ها، انعقاد پروتئین و ساختار باکتری و تسهیل رنگ آمیزی است. برای جلوگیری از شسته شدن توسط آب در حین شستشو، باکتری ها را به چسبیدن به لام تشویق کنید. تغییر نفوذپذیری باکتری به رنگ، که برای رنگ آمیزی ساختارهای داخل سلولی باکتری مفید است. معمولاً با حرارت دادن با شعله ثابت می شود و اسمیر خشک شده به سرعت 3 بار از روی شعله عبور داده می شود. بهتر است هنگام تماس با سرسره، پوست پشت دست نسوزد.

3. رنگرزی با توجه به اهداف مختلف بازرسی، روش های مختلف رنگرزی را برای رنگرزی انتخاب کنید. هنگام رنگ آمیزی، محلول رنگ را به صورت قطره ای اضافه کنید تا پوشش بیشتر شود.

4. Mordant به هر ماده ای که بتواند میل ترکیبی بین رنگ و جسم رنگ شده را افزایش دهد، رنگ را روی جسم رنگ شده ثابت کند و باعث تغییر در نفوذپذیری غشای سلولی شود، موردانت نامیده می شود. معمولاً از آلوم، اسید تانیک، نمک های فلزی و ید و غیره استفاده می شود و از حرارت دادن نیز برای تقویت رنگ استفاده می شود. موردانت ها را می توان بین رنگ آمیزی اولیه و ضد رنگ آمیزی استفاده کرد و همچنین می تواند بعد از تثبیت یا در فیکساتور و رنگ آمیزی استفاده شود.

5. رنگ زدایی هر عامل شیمیایی که بتواند رنگ جسم رنگ شده را از بین ببرد، رنگ زدا نامیده می شود. معمولاً از اتانول، استون و غیره به عنوان رنگبردار استفاده می شود. عامل رنگ‌زدایی می‌تواند درجه پایداری ترکیب باکتری‌ها و رنگ‌ها را تشخیص دهد که می‌تواند برای رنگ‌آمیزی افتراقی استفاده شود.

6. ضد رنگ آمیزی باکتری ها یا ساختارهای آنها که رنگ زدایی شده اند، اغلب برای مشاهده آسان، با محلول ضد رنگ آمیزی می شوند. رنگ محلول ضد رنگ با محلول رنگرزی اولیه متفاوت است تا کنتراست شدیدی ایجاد کند. رنگ متقابل نباید خیلی قوی باشد تا رنگ لکه اولیه را نپوشاند.