عملکرد هر فیلتر در میکروسکوپ فلورسانس
بحرانی ترین مشکل میکروسکوپ فلورسانس، ترکیب فیلترهای نوری است. هم فیلتر تحریک و هم فیلتر محافظ باید برای مواد فلورسنت مشاهده شده مناسب بوده و با یکدیگر مطابقت داشته باشند. برای برخی از برنامه های خاص، اگر در انتخاب فیلترها خطاهایی وجود داشته باشد، ممکن است منجر به سوء تفاهم و حتی نتایج نادرست شود. دستاوردهای فناوری میکروسکوپ فلورسانس از فیلترهای-کیفیت بالا و گروههای فیلتر که هوشمندانه تطبیق داده میشوند جدا نیست. انواع مختلفی از فیلترها برای میکروسکوپ فلورسانس وجود دارد.
1. فیلتر جذب کننده حرارت
فیلتر جذب کننده گرما یک فیلتر ضروری برای جلوگیری از آسیب تابش حرارتی در طیف منبع نور به سیستم نوری است. میکروسکوپهای پیشرفته اولیه مجهز به بطریهایی به شکل طبل بودند که میتوانستند آب مقطر را بهعنوان دستگاه جذب گرما در خود نگه دارند. میکروسکوپهای تحقیقاتی در مقیاس بزرگ-به فیلترهای جذبکننده حرارت شیشهای در جعبههای نور منبع نور یا محفظههای لامپ مجهز هستند که ورقههای شیشهای شفاف و کمی زرد هستند. فیلترهای Leitz KG1 (2 میلی متر) و BG38 (4 میلی متر) می توانند تقریباً تمام طیف های ماوراء بنفش و نور مرئی را با نرخ انتقال نور تا 98٪ منتقل کنند. فقط به طور انتخابی تابش گرمایی مادون قرمز را جذب می کند.
2. فیلتر تحریک
فیلترهای تحریک می توانند به طور انتخابی خطوط طیفی با طول موج بلند را جذب کنند و فقط نور فرابنفش را منتقل کنند. فیلترهای نور بنفش، آبی و سبز فیلترهای تحریک هستند. Zeiss، Reichert، سری B Olympus، سری G، سری BG، سری UG Shott، سری H، G، سری BP Opton، سری BP Leitz و سایر فیلترهای نوری همگی فیلترهای تحریک هستند.
3. فیلتر مسدود کردن
فیلتر مسدود کننده فیلتری است که به طور انتخابی خطوط طیفی موج کوتاه و پرتوهای مادون قرمز را جذب می کند و در عین حال امکان مشاهده امواج طولانی تر را فراهم می کند. عملکرد آن این است که ناظر را قادر می سازد تا فلورسانس برانگیخته شده توسط شی مورد بازرسی را ببیند، در حالی که از قرنیه ناظر در برابر آسیب اشعه ماوراء بنفش محافظت می کند.
4. فیلتر جداسازی رنگ
فیلتر جداسازی رنگ یک آینه فیلتر است که نور تحریک را به جسم مورد بازرسی منعکس می کند و باعث می شود جسم فلورسانس ساطع کند و سپس فلورسانس را به چشمی منتقل می کند. این نوع فیلتر فقط در یک کندانسور نور در حال سقوط قابل استفاده است، در حالی که میکروسکوپ فلورسانس نور عبوری نیازی به جداسازی رنگ ندارد.
5. فیلتر تداخل
فیلتر تداخل نوعی فیلتر{0}تحریک با عملکرد بالا است. این فیلتری است که از روی هم قرار دادن چند لایه فلزی نازک بین دو ورقه شیشه ای صیقلی ساخته می شود. ضریب شکست هر لایه فلزی نازک متفاوت است، بنابراین خطوط طیفی با طول موج های مختلف منبع نور روشنایی به طور مکرر بر روی هر لایه فلزی منعکس می شود. برخی از خطوط طیفی با طول موج های معین با تداخل مخرب لغو می شوند، در حالی که برخی دیگر با تداخل افزایشی تقویت می شوند و از طریق آن منتقل می شوند. این منجر به فیلتری با طیف انتقال باریک و عرض نیم پیک تنها 6-20 نانومتر می شود. انتقال می تواند به 60٪ -70٪ برسد.
