مشاهده فلورسانس میکروسکوپ نوری
فلورسانس به فرآیندی اطلاق میشود که در آن یک ماده فلورسنت تقریباً به طور همزمان با نوری با طول موج خاص تابش میکند نوری با طول موج طولانیتر ساطع میکند (شکل 1). هنگامی که نور با طول موج خاص (طول موج تحریک) به مولکول برخورد می کند، مانند نور فلوروفور، انرژی فوتون توسط الکترون های مولکول جذب می شود. سپس، الکترونها از حالت پایه (S0) به سطح انرژی بالاتر، حالت برانگیخته (S1') منتقل میشوند. این فرآیند تحریک① نامیده می شود. الکترون به مدت 10-9–{4}} ثانیه در حالت برانگیخته باقی میماند، که طی آن الکترون مقداری انرژی② از دست میدهد. در طی فرآیند خروج الکترون ها از حالت برانگیخته (S1) و بازگشت به حالت پایه③، انرژی باقیمانده جذب شده در طول فرآیند تحریک آزاد می شود.
نمودار فلورسنت جابلونسکی
زمان ماندن مولکول فلورسنت در حالت برانگیخته، طول عمر فلورسانس است که عموماً در سطح نانوثانیه است و یک ویژگی ذاتی خود مولکول فلورسنت است. تصویربرداری طول عمر فلورسانس (FLIM)، که از فناوری تصویربرداری طول عمر فلورسانس استفاده میکند، میتواند علاوه بر تصویربرداری شدت فلورسانس، اندازهگیریهای عملکردی عمیقتری را انجام دهد و ترکیب مولکولی، برهمکنشهای بین مولکولی، و ریزمحیط مولکولها و غیره را به دست آورد. با تصویربرداری نوری معمولی بدست آورید.
یکی دیگر از ویژگی های مهم فلورسانس، تغییر استوکس، اختلاف طول موج بین پیک های تحریک و انتشار است (شکل 2). به طور معمول طول موج انتشار بیشتر از طول موج تحریک است. این به این دلیل است که الکترون ها پس از تحریک ماده فلورسنت و قبل از آزاد کردن فوتون، بخشی از انرژی خود را از طریق فرآیند آرام سازی از دست می دهند. مشاهده مواد فلورسنت با تغییرات استوکس بزرگتر در زیر میکروسکوپ فلورسانس آسانتر است.
میکروسکوپ فلورسانس
میکروسکوپ فلورسانس یک میکروسکوپ نوری است که از خواص فلورسانس برای مشاهده و تصویربرداری استفاده می کند و به طور گسترده در زمینه های مختلفی مانند زیست شناسی سلولی، نوروبیولوژی، گیاه شناسی، میکروبیولوژی، آسیب شناسی و ژنتیک استفاده می شود. تصویربرداری فلورسانس دارای مزایای حساسیت بالا و ویژگی بالا است و برای مشاهده توزیع پروتئینها و اندامکهای خاص در بافتها و سلولها، مطالعه کولوکالیزاسیون و برهمکنش، ردیابی فرآیندهای دینامیک زندگی مانند تغییرات غلظت یون بسیار مناسب است. ، و غیره.
بیشتر مولکولهای موجود در سلولها فلورسانس نمیکنند و اگر میخواهید آنها را ببینید، آنها را فلورسنت میزنید. روشهای زیادی برای نشانگذاری فلورسنت وجود دارد، مانند برچسبگذاری مستقیم (مانند استفاده از DAPI برای برچسبگذاری DNA)، یا رنگآمیزی ایمنی با استفاده از خواص اتصال آنتیژنی آنتیبادیها، یا استفاده از پروتئینهای فلورسنت (مانند GFP، پروتئین فلورسنت سبز) برای برچسبگذاری پروتئینهای هدف. ، و اتصال برگشت پذیر. رنگهای مصنوعی (مانند فورا{1}}) و غیره
میکروسکوپ فلورسانس معکوس MF53-N
در حال حاضر میکروسکوپ فلورسانس به تجهیزات استاندارد تصویربرداری آزمایشگاه ها و بسترهای تصویربرداری مختلف تبدیل شده است و کمک خوبی برای آزمایش های روزانه ما است. میکروسکوپ های فلورسانس عمدتاً به سه دسته تقسیم می شوند: میکروسکوپ های فلورسانس قائم (مناسب برای برش دادن)، میکروسکوپ های فلورسانس معکوس (مناسب برای سلول های زنده، با در نظر گرفتن برش دادن)، استریوسکوپ های فلورسنت (مناسب برای نمونه های بزرگتر، مانند گیاهان، گورخرماهی ها ) ، مداکا، اندام های موش/موش و غیره).
فناوری تصویربرداری میکروسکوپ فلورسانس به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرد و انواع مختلفی دارد و فناوری های جدید هنوز در حال ظهور هستند. شما می توانید فناوری را برای تکمیل تحقیقات خود انتخاب کنید.
