روش تشخیص میکروسکوپ فلورسانس
میکروسکوپ فلورسانس
میکروسکوپ فلورسانس یک ابزار اساسی برای سیتوشیمی ایمونوفلورسانس است. از اجزای اصلی مانند منبع نور، سیستم صفحه فیلتر و سیستم نوری تشکیل شده است. از طول موج خاصی از نور برای برانگیختن نمونه و انتشار فلورسانس استفاده میکند که از طریق یک سیستم عینی و چشمی برای مشاهده تصویر فلورسانس نمونه بزرگنمایی میشود (شکل 1).
(1) منبع نور
امروزه معمولاً از لامپ جیوه ای با فشار 200 وات به عنوان منبع نور استفاده می شود. از شیشه کوارتز، با شکل کروی در وسط و مقدار مشخصی جیوه پر شده است. در حین کار، تخلیه بین دو الکترود باعث تبخیر جیوه می شود و فشار داخل کره به سرعت افزایش می یابد. هنگامی که جیوه کاملاً تبخیر می شود، می تواند به 50-70 فشار اتمسفر استاندارد برسد، که معمولاً حدود 5-15 دقیقه طول می کشد. لومینسانس لامپ های جیوه ای با فشار فوق العاده بالا در نتیجه تخلیه بین الکترودها است که به طور مداوم مولکول های جیوه را جدا کرده و کاهش می دهد و فوتون ساطع می کند. این نور ماوراء بنفش و بنفش آبی قوی ساطع می کند که برای تحریک مواد مختلف فلورسنت کافی است، بنابراین در میکروسکوپ های فلورسانس به طور گسترده ای استفاده می شود.
اقدامات احتیاطی برای استفاده از میکروسکوپ فلورسانس
(1) دستورالعمل های کارخانه میکروسکوپ فلورسانس را به شدت دنبال کنید و برنامه را خودسرانه تغییر ندهید.
(2) بازرسی باید در یک اتاق تاریک انجام شود. پس از ورود به تاریکخانه، برق را وصل کنید و لامپ جیوه ای فشار قوی را برای 5-15 دقیقه روشن کنید. پس از اینکه منبع نور نور قوی ساطع کرد و تثبیت شد، قبل از شروع به مشاهده نمونه، چشم ها باید کاملاً با اتاق تاریک سازگار شوند.
(3) برای جلوگیری از آسیب UV به چشم ها، هنگام تنظیم منبع نور باید از عینک محافظ استفاده شود.
(4) زمان بازرسی باید هر بار 1-2 ساعت باشد. اگر از 90 دقیقه بیشتر شود، شدت نور لامپ جیوه فشار بالا به تدریج کاهش می یابد و فلورسانس ضعیف می شود. نمونه هایی که به مدت 3-5 روز در معرض اشعه ماوراء بنفش قرار گرفتند
پس از دقیقه، فلورسانس نیز به طور قابل توجهی کاهش یافته است. بنابراین، حداکثر مدت زمان نباید از 2-3 ساعت تجاوز کند.
(5) طول عمر منبع نور میکروسکوپ فلورسنت محدود است و برای صرفه جویی در زمان، نمونه باید به صورت متمرکز بررسی شود.
در زمان صرفه جویی کنید و از منبع نور محافظت کنید. هنگامی که هوا گرم است، باید یک فن برقی اضافه کرد تا گرما را دفع کند و خنک شود. هنگام تعویض لامپ جدید، زمان استفاده باید از ابتدا ثبت شود. وقتی لامپ خاموش شد و میخواهید دوباره از آن استفاده کنید، قبل از روشن کردن لامپ باید منتظر بمانید تا به اندازه کافی خنک شود. از روشن کردن منبع نور چندین بار در روز خودداری کنید.
(6) بلافاصله پس از رنگ آمیزی نمونه را مشاهده کنید، زیرا فلورسانس به تدریج در طول زمان ضعیف می شود. اگر نمونه در کیسه پلاستیکی پلی اتیلن در دمای 4 درجه نگهداری شود، می تواند زمان تضعیف فلورسانس را به تاخیر بیاندازد و از تبخیر عامل نصب جلوگیری کند.
(7) معیارهای قضاوت برای روشنایی فلورسانس به طور کلی به چهار سطح تقسیم می شوند، یعنی "یک" - بدون یا فلورسانس ضعیف قابل مشاهده است. "+" - فقط فلورسانس قابل مشاهده است. ++- با فلورسانس روشن قابل مشاهده است. "+++" - فلورسانس قابل مشاهده و خیره کننده.
