روش شمارش میکروبی مستقیم

روش شمارش میکروبی مستقیم

1. رقیق سازی
سوسپانسیون مخمر دم را به طور مناسب رقیق کنید. اگر محلول باکتری غلیظ نباشد، نیازی به رقیق شدن ندارد.

2. اتاق شمارش بازرسی آینه
قبل از افزودن نمونه ها، یک بررسی میکروسکوپی از محفظه شمارش تخته شمارش انجام دهید. اگر کثیفی وجود دارد، قبل از شمارش باید تمیز شود.

3. نمونه ها را اضافه کنید
صفحه شمارش سلول های خونی تمیز و خشک را با یک لیوان پوششی بپوشانید و سپس از یک قطره چکان دهان ریز استریل استفاده کنید تا یک قطره کوچک (نه خیلی زیاد) از مایع مخمر آبجو رقیق شده را از لبه شیشه بریزید و به مایع باکتری اجازه دهید از طریق نفوذ مویرگی در امتداد شکاف وارد اتاق شمارش شوید. به طور کلی، اتاق شمارش را می توان با مایع باکتریایی پر کرد. مراقب باشید که حباب تولید نکنید.

4. شمارش میکروسکوپی
پس از 5 دقیقه ایستادن، صفحه شمارش سلول های خونی را روی مرحله میکروسکوپ قرار دهید، ابتدا از یک میکروسکوپ کم قدرت برای تعیین محل محفظه شمارش استفاده کنید و سپس برای شمارش به میکروسکوپ پرقدرت بروید. اگر مشخص شد که محلول باکتری قبل از شمارش خیلی غلیظ یا خیلی رقیق شده است، قبل از شمارش باید رقت را دوباره تنظیم کرد. نیاز کلی رقت نمونه حدود 5-10 سلول باکتری در هر شبکه کوچک است. از هر اتاق شمارش 5 سلول (اختیاری 4 گوشه و سلول مرکزی) را برای شمارش انتخاب کنید. سلول های باکتریایی واقع در خط شبکه عموماً فقط در خطوط بالا و راست شمارش می شوند. هنگامی که مخمر جوانه می زند و اندازه جوانه به نیمی از سلول مادر می رسد، دو شمارش باکتری انجام می شود. شمارش نمونه مستلزم بدست آوردن مقادیر از دو محفظه شمارش برای محاسبه محتوای باکتریایی نمونه است.

5. هموسیتومتر را تمیز کنید
پس از استفاده، هموسیتومتر را با ستون آب روی شیر آب بشویید. با اجسام سفت نشویید. پس از شستن، با هوا خشک کنید یا با سشوار خشک کنید. با بررسی میکروسکوپی، مشاهده کنید که آیا باکتری های باقیمانده یا رسوبات دیگری در هر سلول کوچک وجود دارد یا خیر. در صورت تمیز نبودن باید چندین بار شسته شود تا تمیز شود.