تفاوت بین میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ نوری معمولی
تفاوت میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ نوری معمولی، میکروسکوپ فلورسانس و میکروسکوپ نوری معمولی متفاوت است، مشاهده نمونه از طریق روشنایی منبع نور معمولی نیست، بلکه استفاده از طول موج خاصی از نور (معمولاً ماوراء بنفش، آبی بنفش) است. تحریک نمونه در زیر میکروسکوپ در داخل ماده فلورسنت، به طوری که نور فلورسنت ساطع می کند، بنابراین نقش میکروسکوپ فلورسانس در منبع نور یک روشنایی مستقیم نیست، بلکه به عنوان نوعی تحریک نمونه های فلورسانس داخلی است. منبع میکروسکوپ فلورسانس یک نور مستقیم نیست، بلکه به عنوان یک منبع انرژی برای تحریک ماده فلورسنت در داخل نمونه است. دلیل اینکه ما می توانیم نمونه را مشاهده کنیم به دلیل روشنایی منبع نور نیست، بلکه پدیده فلورسانس است که توسط ماده فلورسنت در نمونه پس از جذب انرژی نوری برانگیخته ارائه می شود. مشاهده می‌شود که ویژگی‌های میکروسکوپ فلورسانس عمدتاً این است که منبع نور آن می‌تواند تعداد زیادی محدوده طول موج خاص نور تحریک را تأمین کند، به طوری که مواد فلورسنت در نمونه مورد بررسی می‌توانند شدت نور تحریک لازم را به دست آورند. در عین حال، میکروسکوپ فلورسانس باید دارای یک سیستم فیلتر مربوطه باشد. میکروسکوپ فلورسانس ابزار اساسی برای **هیستوشیمی فلورسانس است. این از منبع نور فوق العاده با فشار بالا، سیستم فیلتر (شامل صفحه فیلتر تحریک و سرکوب)، سیستم نوری و سیستم عکاسی و سایر اجزای اصلی تشکیل شده است، استفاده از طول موج مشخصی از نور برای تحریک نمونه برای انتشار فلورسانس است.
1. روش تحریک فلورسانس: با توجه به محدوده طول موج نور به روش تحریک UV (با استفاده از نور ماوراء بنفش) و روش تحریک BV (با استفاده از نور بنفش آبی) تقسیم می شود دو نوع روش تحریک UV کوتاهتر از 400 نانومتر در نزدیکی نور ماوراء بنفش برای برانگیختگی در این روش نور تحریک مرئی وجود ندارد، بنابراین فلورسانس مشاهده شده فلورسانس ذاتی رنگ را نشان می دهد و به راحتی می توان فلورسانس خاص روی نمونه را از خود فلورسانس بافت زمینه تشخیص داد.
2. روش تحریک BV: این روش بر روی 404 نانومتر، 434 نانومتر از نور ماوراء بنفش تا نور آبی برای تحریک متمرکز شده است. در این روش از نور آبی برای تابش نمونه استفاده می شود، بنابراین فیلتر قطع کننده سیستم مشاهده فلورسانس باید از فیلتری استفاده کند که بتواند نور آبی را کاملا مسدود کند و فلورسانس سبز و زرد مورد نظر را به طور کامل عبور دهد. رنگدانه های فلورسنت برای روش آنتی بادی فلورسنت. از آنجایی که طول موج حداکثر جذب نور تحریک و طول موج حداکثر گسیل فلورسانس به یکدیگر نزدیک هستند، فیلترهای مورد استفاده در روش تحریک BV باید فیلترهای قطع تیز باشند. در این روش از نور آبی به عنوان نور تحریک استفاده می شود، بنابراین راندمان جذب فلوروکروم بالاتر است و می توان تصویر روشن تری به دست آورد. نقطه ضعف این است که فلورسانس زیر 500 نانومتر دیده نمی شود و بالای 500 نانومتر کل تصویر زرد به نظر می رسد. در روش آنتی بادی فلورسنت، بیشتر ویژگی بر اساس رنگ منحصر به فرد فلوروکروم قضاوت می شود، بنابراین معایب روش تحریک BV که در بالا توضیح داده شد، هنگام بحث در مورد ویژگی ظریف، بسیار تأثیرگذار است.
