تعیین جمعیت میکروبی - روش شمارش میکروسکوپی مستقیم!
I. الزامات هدف
1، برای روشن شدن اصل شمارش صفحه هماتوکریت.
2، بر روش شمارش میکروبی با استفاده از صفحه هماتوکریت مسلط شوید.
II. اصول اساسی
روش شمارش مستقیم میکروسکوپی مقدار کمی از تعلیق نمونه است که باید روی یک لام مخصوص با ناحیه و حجم مشخص (همچنین به عنوان شمارنده باکتریولوژیک شناخته می شود) آزمایش شود، در میکروسکوپ به طور مستقیم یک روش ساده، سریع و بصری شمارش می شود. در حال حاضر، شمارشگرهای باکتریولوژیک رایج داخلی و خارجی عبارتند از: صفحه شمارش سلول های خون، شمارنده های باکتریولوژی پیتروف هاوزر و شمارنده های باکتریولوژیک هاکسلی و غیره که می توانند برای مخمر، باکتری ها، هاگ های کپک و دیگر سوسپانسیون های شمارش استفاده شوند. یکسان است. دو نوع اخیر شمارنده دارای حجم کلی 0 هستند.02mm3 بعد از پوشاندن روکش، و فاصله بین روکش و برش حامل فقط 0.02 میلی متر است، بنابراین سلول های کوچکتر مانند باکتری ها را می توان با هدف غوطه وری در روغن مشاهده و شمارش کرد. علاوه بر استفاده از این شمارنده ها، یک روش تخمینی نیز وجود دارد که نسبت مساحت لام به ناحیه دید مستقیماً زیر میکروسکوپ مشاهده می شود که عموماً برای بررسی باکتریولوژیکی شیر گاو استفاده می شود. مزایای روش شمارش میکروسکوپ مستقیم بصری، سریع و آسان برای کار است. با این حال، عیب این روش این است که نتیجه آن معمولاً مجموع موجودات زنده و مرده است. روشهایی برای غلبه بر این عیب وجود دارد، مانند ترکیب کشت ریز محفظهای رنگآمیزی شده با باکتریهای زنده (مدت کوتاه) و افزودن مهارکنندههای سیتوکینزیس برای دستیابی به هدف شمارش تنها موجودات زنده.
مراحل عملیات
1، آماده سازی تعلیق باکتریایی
برای تهیه سوسپانسیون باکتریایی مخمر آبجو با غلظت مناسب از نمک استریل استفاده کنید.
2، محفظه شمارش آینه
قبل از افزودن نمونه ها، ابتدا باید محفظه شمارش صفحه شمارش بررسی شود. اگر کثیفی وجود دارد، قبل از شمارش باید تمیز و خشک شود.
3، اضافه کردن نمونه
صفحه شمارش سلول های خونی را تمیز و خشک کنید که با یک ورقه پوششی پوشانده شده است، و سپس از یک بورت مویرگی استریل برای تکان دادن سوسپانسیون مخمر آبجو از لبه ورقه پوششی استفاده کنید تا قطره کوچکی بریزد، به طوری که مایع باکتری در امتداد شکاف با نفوذ مویرگی به داخل شکاف استفاده کنید. محفظه شمارش به طور خودکار، به طور کلی محفظه شمارش را می توان با مایع باکتریایی پر کرد. هنگام نمونه برداری، ابتدا محلول باکتریایی باید به خوبی تکان داده شود. هنگام افزودن نمونه ها، محفظه شمارش نباید حباب هوا داشته باشد.
4، شمارش میکروسکوپی
پس از افزودن نمونه، اجازه دهید به مدت 5 دقیقه بماند، سپس صفحه شمارش سلول های خونی را روی مرحله حامل میکروسکوپ قرار دهید، ابتدا محل محفظه شمارش را با بزرگنمایی کم پیدا کنید و سپس برای شمارش آن را به بزرگنمایی زیاد تغییر دهید. شدت نور میکروسکوپ را به طور مناسب تنظیم کنید، زیرا میکروسکوپ دارای بازتابنده نور نیز باید توجه داشته باشد که نور نباید به یک طرف سوگیری کند، در غیر این صورت میدان دید به راحتی نمی توان خط شبکه محفظه شمارش را مشخص کرد، یا فقط خط عمودی را ببینید یا فقط خط افقی را ببینید. اگر قبل از شمارش مایع باکتری بیش از حد غلیظ یا رقیق شده باشد، لازم است قبل از شمارش، رقت را مجدداً تنظیم کنید. نیازهای کلی رقت نمونه حدود 5 تا 10 باکتری در هر سلول مناسب است. برای هر اتاق شمارش، موجودات موجود در 5 محفظه میانی (4 گوشه و یک محفظه میانی در مرکز) برای شمارش انتخاب می شوند. ارگانیسم های واقع در خطوط شبکه معمولاً فقط در خطوط بالا و راست شمارش می شوند. در مورد جوانه زدن مخمر، هنگامی که اندازه بدن جوانه به نصف سلول مادر برسد، به عنوان دو جاندار به حساب می آید. شمارش نمونه از دو محفظه شمارش در مقدار متوسط برای محاسبه محتوای باکتریایی نمونه.
5. تمیز کردن صفحه هماتوکریت
پس از استفاده صفحه شمارش گلبول های خون را با آب زیر شیر آب بشویید، از اجسام سخت برای شستن و مسواک زدن استفاده نکنید، خودتان آن را خشک کنید یا بعد از شستن از سشوار برای سشوار استفاده کنید. صفحه را به صورت میکروسکوپی بررسی کنید تا ببینید آیا موجودات باقیمانده یا رسوبات دیگری در هر محفظه وجود دارد یا خیر. در صورت تمیز نبودن باید شستشو را تکرار کرد تا تمیز شود.
