مقایسه میکروسکوپ کانفوکال و میکروسکوپ نوری معمولی
میکروسکوپ ابزار اصلی برای مشاهده سلول ها است. بسته به منبع نور می توان آن را به دو دسته تقسیم کرد: میکروسکوپ نوری و میکروسکوپ الکترونی. اولی از نور مرئی (میکروسکوپ فرابنفش تا نور ماوراء بنفش) به عنوان منبع نور استفاده می کند، در حالی که دومی از یک پرتو الکترونی به عنوان منبع نور استفاده می کند. میکروسکوپ نوری معمولی و میکروسکوپ کانفوکال لیزری متعلق به یک میکروسکوپ نوری هستند.
I. میکروسکوپ نوری عمومی
میکروسکوپ بیولوژیکی معمولی از سه بخش تشکیل شده است، یعنی: ① سیستم روشنایی، از جمله منبع نور و کندانسور. ② سیستم بزرگنمایی نوری، متشکل از اهداف و چشمی، بدنه اصلی میکروسکوپ است، به منظور از بین بردن انحراف کروی و انحراف رنگی، چشمی ها و اهداف از یک گروه لنز پیچیده تشکیل شده اند. ③ دستگاه مکانیکی، مورد استفاده برای تعمیر مواد و مشاهده راحتی.
شی میکروسکوپ روشن است نه تنها با بزرگنمایی تعیین می شود، بلکه با قدرت تفکیک میکروسکوپ (رزولوشن)، قدرت تفکیک اشاره به میکروسکوپ (یا چشم انسان از هدف 25 سانتی متری) می تواند شی فواصل کوچک zui را تشخیص دهد. تشخیص اندازه قدرت تفکیک با طول موج نور و نرخ دهانه آینه و ضریب شکست محیط تعیین می شود که در فرمول بیان شده است:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 که در آن: n=ضریب شکست محیط;=زاویه دهان آینه (نمونه روی دهانه عدسی شیئی زاویه کشش)، NA=نرخ دهانه آینه (دیافراگم عددی). زاویه دهانه آینه همیشه باید کمتر از 180 باشد، بنابراین مقدار zui سینا/2 لزوماً کمتر از 1 است.
ضریب شکست شیشه ای که در تولید عدسی های نوری استفاده می شود 1.65 ~ 1.78 است، ضریب شکست محیط مورد استفاده هر چه به شیشه نزدیک تر باشد بهتر است. برای عدسی شیئی خشک، متوسط هوا، نرخ دهان آینه معمولاً 0 است.05 ~ 0.95; لنز روغن با روغن سدر به عنوان متوسط، نرخ دهان آینه می تواند نزدیک به 1.5 باشد.
طول موج نور معمولی 400~700nm است، بنابراین مقدار توان تفکیک میکروسکوپ کمتر از 0.2μm نخواهد بود، قدرت تفکیک چشم انسان 0.2 میلی متر است، بنابراین طراحی کلی میکروسکوپ بزرگنمایی zui معمولا 1000X است.
دوم، میکروسکوپ اسکن کانفوکال لیزری
میکروسکوپ اسکن کانفوکال لیزری (میکروسکوپ اسکن کانفوکال لیزری)، با لیزر به عنوان منبع نور اسکن، نقطه به نقطه، خط به خط، تصویربرداری اسکن سریع سطح به سطح، لیزر اسکن و مجموعه فلورسانس از یک هدف مشترک، نقطه تمرکز لیزر اسکن عینی ، بلکه تصویربرداری آنی از نقطه شی. به دلیل طول موج کوتاه تر پرتو لیزر، پرتو بسیار ظریف است، بنابراین میکروسکوپ اسکن لیزری کانفوکال وضوح بالایی دارد، حدود 3 برابر میکروسکوپ نوری معمولی. سیستم یک بار متمرکز می شود و اسکن به یک صفحه از نمونه محدود می شود. زمانی که عمق فوکوس یکسان نباشد، می توان تصاویر سطوح مختلف عمق نمونه را به دست آورد و این اطلاعات تصویری در کامپیوتر ذخیره می شود، از طریق تحلیل و شبیه سازی کامپیوتری، می توان ساختار سه بعدی نمونه سلولی را نشان داد. .
