میکروسکوپ بیولوژیکی بر روی حجم بلوک های بافتی
بیومیکروسکوپی تا به امروز، تثبیت در یخ، مقاطع فوقالعاده نازک منجمد و دستکاری خشک منجمد روشهای معمولی برای میکروفیلدهای اشعه ایکس بافتها و سلولها هستند. جزئیات روش در موارد زیر توضیح داده شده است:
میکروسکوپهای بیولوژیکی میکروسکوپهای دارای عدسی کندانسور را میتوان برای دستیابی به روشنایی متوسط به بالا و پایین حرکت داد، یا میتوان دیافراگم گسترش دهنده نور متغیر را برای دستیابی به روشنایی متوسط 9b تغییر داد. اگر نور آفتابی باشد، می توان محدوده لکه بینی را به طور مناسب افزایش داد و دیافراگم نور متغیر را به طور مناسب بزرگ کرد. اگر نور بیش از حد قوی است، آینه نورافکن می تواند مناسب پایین، دیافراگم جهش نور متغیر برای کاهش مناسب است. اگر در این حالت هنوز احساس کور شدن دارید، می توانید فیلتر مناسبی را که در براکت زیر نورافکن قرار داده شده است انتخاب کنید. این را می توان به دست آورد تا شما را از روشنایی راضی کند. البته در تنظیم موقعیت های بالا و پایین لنز خازنی می توان اندازه دیافراگم خوانش نور و انتخاب فیلترهای مناسب را تغییر داد، یعنی بعد از مدتی تمرین و تجربه.
میکروسکوپ بیولوژیکی یک موضوع بسیار مهم در فرآیند نمونه برداری و جداسازی سلول ها، خشک کردن انجمادی و تعبیه رزین (FD) پس از انجماد بروشورهای اولترا، خشک کردن انجمادی پس از اجرای ریز هر قسمت از محتوای ترکیب عنصری 65 باید باشد. بسیار با دقت مورد استفاده قرار می گیرد و نباید به سلول های مورد مشاهده و تجزیه و تحلیل آسیب برساند. از آنجایی که تجزیه و تحلیل ریز ناحیه اشعه ایکس تنها چند مرحله نیست و هزینه آن بسیار بالاست، اگر پس از مدت زمان طولانی و چندین مرحله پردازش، سلول های مورد تجزیه و تحلیل سلول های آسیب دیده یا سلول های مرده باشند، نتیجه گیری اشتباه می شود. بسیار تاسف آور است به عنوان مثال، کاردیومیوسیت های جدا شده توسط تیمار کلاژناز دارای دو مورفولوژی هستند، یکی به شکل میله ای بلند و دیگری گرد است. دومی سلول های در حال مرگ هستند که در طول جداسازی سلول آسیب دیده اند.
بیومیکروسکوپی محتوای و توزیع الکترولیت ها در این دو نوع سلول بسیار متفاوت است. سدیم بسیار زیاد و پتاسیم بسیار کم در کاردیومیوسیتهای گرد بود و غلظت کلسیم در میتوکندری بسیار بالا بود. پس از بررسی سایر روشهای تحلیلی، نشان داده شد که سدیم بالا و پتاسیم کم در سلولهای گرد و کلسیم بالا در میتوکندری، نتیجه آسیب به غشای سلولی در طول جداسازی سلول است. تثبیت سرد سلول ها و بافت ها اغلب با تثبیت کوئنچ و سپس نگهداری در نیتروژن مایع انجام می شود. تثبیت کوئنچ برای اثربخشی نگهداری مهم است. سلولهای زنده یا بافتهای تازه غنی از آب هستند، زمانی که خاموش کردن اغلب سلولها یا بافتها است و عامل سرد (مخصوصاً با نیتروژن مایع سرد خالص) مستقیماً با قسمتهای اولین انجماد تماس پیدا میکند، در نتیجه یک "پوسته" تشکیل میشود. از تثبیت مرکز سلول در سرما جلوگیری می کند. در نتیجه، کریستال های یخ اغلب در مرکز سلول های بزرگتر در طول تجزیه و تحلیل میکروسلولی اشعه ایکس یافت می شوند. برای جلوگیری از این اتفاق، از موادی با نقطه ذوب بالاتر از نیتروژن مایع اما کمتر از 806c خشک به عنوان خنک کننده استفاده می شود. بسیاری از این مواد وجود دارد، اما * آسان برای به دست آوردن، ارزان، پروپان غلیظ (نقطه جوش 42.120c، نقطه ذوب 187.10c، وزن مولکولی 44.1)، سرعت خنک کننده * سریع است. با این حال، این مضرات قابل اشتعال بودن را دارد.
میکروسکوپ بیولوژیکی را می توان بر روی یک فیبر عضلانی قفسه مخصوص قرار داد، به طوری که انقباض فیبر عضلانی برای رسیدن به یک فاز زمانی خاص باید ثابت شود، بلافاصله نازل را شروع کنید، به طوری که پروپان مایع به جت فیبر عضلانی برسد، به طوری که خاموش شدن سرما ثابت شد سپس فیبر عضلانی همراه با قفسه خارج می شود و در نیتروژن مایع قرار می گیرد. در صورت تثبیت سلول های خونی یا سلول های جدا شده، ابتدا سانتریفیوژ با سرعت کم به سلول ها متمرکز می شود، سلول ها به رسانایی حرارتی خوبی از لوله نقره ای منتقل می شوند، لوله به لاشه پروپان مایع سرد ثابت می شود. لوزالمعده موش آزمایشگاهی هال ثابت، دو قطعه اول فولاد با هلیوم مایع (یا نیتروژن مایع) پیش خنک شده، با یک گیره گیره دو قطعه مس در جلو و پشت پانکراس قرار می گیرد، به طوری که خاله غده خاموش کننده فیکساسیون سرما. بافت ها یا سلول ها را می توان برای مدت طولانی پس از خاموش شدن و تثبیت در نیتروژن مایع ذخیره کرد.
