ساختار اصلی میکروسکوپ فلورسانس کانفوکال
(1) ماژول اسکن
ماژول اسکن عمدتاً از یک نوار نور سوراخ سوزنی (کنترل ضخامت برش های نوری)، یک طیف سنجی (تغییر جهت انتشار نور با توجه به طول موج)، یک رنگ سنج فلورسانس انتشار (انتخاب نور در محدوده طول موج معین برای تشخیص) و یک آشکارساز (لوله فتومولتیپلایر). فلورسانس مخلوط در نمونه فلورسنت وارد اسکنر می شود و پس از انتخاب توسط نوار نور پین هول تشخیص، طیف سنج و رنگ سنج به انواع فلورسانس تک رنگ تقسیم می شود که در کانال های فلورسانس مختلف شناسایی می شوند و تصاویر هم کانونی مربوطه را تشکیل می دهند. همزمان، چندین تصویر فلورسانس تک رنگ موازی و تصاویر ترکیبی آنها را می توان بر روی صفحه نمایش کامپیوتر نمایش داد.
(2) سیستم میکروسکوپ فلورسانس
میکروسکوپ جزء اصلی LSCM است که به کیفیت تصویربرداری سیستم مربوط می شود. مسیر نوری میکروسکوپ را می توان به راحتی در یک سیستم نوری بی نهایت دور با گزینه های نوری بدون تأثیر بر کیفیت تصویر و دقت اندازه گیری وارد کرد. هدف باید یک هدف آپوکروماتیک میدان مسطح با دیافراگم عددی بزرگ باشد که برای دریافت فلورسانس و تصویربرداری واضح مفید است. تبدیل گروه لنز شیئی، انتخاب گروه فیلتر رنگ، تنظیم حرکت صحنه، و قفل حافظه صفحه کانونی همگی باید به طور خودکار توسط کامپیوتر کنترل شوند.
میکروسکوپ فلورسانس که در میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری استفاده می شود به طور کلی مانند یک میکروسکوپ فلورسانس معمولی است، اما ویژگی های خاص خود را دارد: باید به یک اسکنر متصل شود، به طوری که لیزر بتواند برای تابش نمونه و ساختن آن به شی میکروسکوپ وارد شود. فلورسانس ساطع شده از نمونه به آشکارساز می رسد. یک دستگاه تبدیل مسیر نور مورد نیاز است که لامپ های جیوه ای را به لیزر تبدیل می کند و می توان شدت نور لامپ جیوه را تنظیم کرد.
(3) لیزرهای رایج
منابع لیزری مورد استفاده در میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری شامل سیستمهای تک لیزری و چند لیزری است و لیزرهای رایج شامل سه نوع زیر هستند:
لیزر نیمه هادی: 405 نانومتر (نزدیک به خط طیفی فرابنفش)
لیزر یون آرگون: ۴۵۷ نانومتر، ۴۷۷ نانومتر، ۴۸۸ نانومتر، ۵۱۴ نانومتر (نور سبز آبی)
لیزر He-Ne: 543 نانومتر (لیزر سبز نور سبز He-Ne) 633 نانومتر (لیزر قرمز نور قرمز He-Ne)
لیزر UV (لیزر UV): 351 نانومتر، 364 نانومتر (نور UV)
(4) تجهیزات کمکی
سیستم های خنک کننده هوا خنک، آب خنک و منابع تغذیه تنظیم شده.
اصل کار میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری این است که ابتدا طول موج مشخصی از نور تحریک را از لیزر ساطع می کند. پس از تقویت، نور از نوار نور سوراخ سوزنی روشن در اسکنر عبور می کند تا منبع نور نقطه ای را تشکیل دهد. عدسی شیئی بر روی صفحه کانونی نمونه تمرکز می کند و نقاط نورانی مربوطه بر روی نمونه برانگیخته شده و فلورسانس ساطع می کنند. پس از عبور از نوار نور سوراخ تشخیص، به آشکارساز می رسد و روی صفحه مانیتورینگ کامپیوتر تصویربرداری می شود. به این ترتیب با تصاویر فلورسانس هر نقطه از نمونه در صفحه کانونی یک تصویر هم کانونی کامل تشکیل می شود که به آن برش نور می گویند.
